蟾酥对豚鼠心脏电生理的影响

蒋洁君，周 婧，马宏跃，吕高虹，喻 斌，段金廒，张军峰，詹 瑧，许惠琴

(南京中医药大学药学院江苏省方剂研究重点实验室，江苏南京 210046)

蟾酥(Chansu，toad venom，Venenum Bufonis Cantor)是我国传统名贵中药，性味辛、温，具有清热解毒、消肿止痛和开窍醒神的功效，人日用剂量为15～30 mg，治疗痈疽疔疮及其他无名肿毒(感染类疾病)外用、内服皆有良效。近年来临床还广泛用于心血管、肿瘤等疾病的治疗，疗效确切［1－2］。蟾酥具有毒性，其所含活性物质蟾蜍甾烯(强心苷类)作用心脏可诱发心律失常。本课题组前期对蟾酥的量-效关系研究表明［3］，口服蟾酥抗炎的人体等效剂量(human equivalent dose，HED)为 9.8 ～ 39.2 mg·d－1，抗肿瘤活性HED 为53.6 ～219.0 mg·d－1，HED ＞292.7 mg·d－1则易产生毒性反应，说明其安全治疗范围窄。临床也有患者误服蟾酥1.5，3和6 g引起心脏中毒而死亡的报道［4－5］。本研究以心电图和心功能为指标，观察了蟾酥对豚鼠心脏的毒性作用。

1 材料与方法

1.1 药物和主要仪器

蟾酥为新鲜制备中华大蟾蜍(Bufo bufo gargarizans Cantor)的耳后腺分泌物的干燥物(南京中医药大学吴启南教授馈赠)。采用高效液相法对所用蟾酥进行分析，主要含有蟾蜍甾烯:脂蟾毒配基0.82%，华蟾毒配基 2.42%，蟾毒灵 1.54%，蟾毒他灵2.42%和远华蟾毒精2.01%。地高辛片(杭州制药有限公司)，经甲醇∶二氯甲烷(1∶1)回流提取2次，过滤，减压浓缩，干燥备用［6］。实验前采用0.4%吐温80水溶液配制成蟾酥生药混悬液和地高辛溶液。MPA2000多道生物信号分析系统(上海奥尔科特生物科技有限公司)。

1.2 动物分组和电生理记录

20只健康豚鼠，雄性，体质量250～300 g，购自上海斯莱克实验动物有限责任公司，动物许可证号:SCXK(沪)2007-0005。以蟾酥临床人中毒量1.5～3 g为实验剂量设计依据，经体表面积法折算豚鼠等效剂量为125～250 mg·kg－1。豚鼠分为4组，每组5只。正常对照组ig给予0.4%吐温80水溶液，蟾酥组豚鼠 ig给予蟾酥125和250 mg·kg－1，阳性对照组豚鼠ip给予地高辛300 mg·kg－1。给药后豚鼠ip给予3.5%水合氯醛麻醉。颈中切口分离左侧颈总动脉，经颈总动脉向左心室插入心室导管，肝素抗凝，连接压力换能器，同时连接肢导联，采用MPA2000多道生物信号分析系统记录豚鼠的在体心电图和心室内压。监测给药后20 min的P-R间期、QRS时程、心率(heart rate，HR)、左心室内压力上升最大速率(the maximum rate of rise of left ventricular pressure，dp/dtmax)、最 大 收 缩 压 (the maximum systolic pressure，Pmax)、心率血压乘积(rate-pressure product，RPP)和最小舒张压(the minimum diastolic pressure，Pmin)。

1.3 统计学分析

2 结果

2.1 蟾酥对豚鼠心电图P-R间期，QRS时程和心率的影响

表1结果显示，与正常对照组相比，蟾酥125和250 mg·kg－1组心电图P-R间期显著延长，分别从(27.8 ±5.1)ms增加至(44.5 ±7.2)和(57.1 ±8.9)ms(P＜0.01)，表明房室传导阻滞;蟾酥125和250 mg·kg－1组心电图 QRS 时程显著增宽，从(42.0 ±18.7)ms分别增宽至(63.3 ±5.0)和(79.4 ±15.4)ms(P＜0.01)，表明室性心律失常。蟾酥组心率较正常对照组显著增加(P＜0.05)，表明心动过速。与阳性对照地高辛比较，蟾酥组心率显著增快(P＜0.01)，但P-R间期和QRS时程无显著性差异。

表1 蟾酥对豚鼠心电图P-R间期，QRS时程和心率的影响Tab.1 Effect of Chansu on P-R，QRS and heart rate in guinea-pigs

2.2 蟾酥对豚鼠心功能影响

如表2所示，蟾酥125和250 mg·kg－1使豚鼠左心室功能发生显著变化，与正常对照组相比，dp/dtmax降 至 112.3 ±38.6 和 (107.7 ±38.5)kPa·s－1，显著下降(P ＜0.01)，Pmax和 RPP 显著降低(P ＜0.05);地高辛也诱导豚鼠dp/dtmax，Pmax和 RPP的下降。蟾酥组与地高辛组比较无显著性差异。说明蟾酥抑制豚鼠心功能，具有负性肌力的毒性作用。与正常对照组相比，蟾酥125和250 mg·kg－1组Pmin分别为 14.1 ±4.9 和(10.7 ±5.7)kPa显著升高(P＜0.05)，说明蟾酥中毒豚鼠的心室舒张功能显著下降。蟾酥组Pmin与地高辛组比较无显著差异。

3 讨论

强心苷类物质的活性和毒性存在明显种属差异［7］。本研究选择较大鼠和小鼠更为敏感的豚鼠，给予蟾酥诱发心脏中毒。中毒豚鼠发生室性早搏，产生宽大QRS波及异常的T波。蟾酥诱导的心电触发效应也引起房室传导阻滞。蟾酥心脏毒性主要表现为心律失常，心电图监测是反映蟾酥毒性的有效手段。本研究结果表明，心功能在出现致死性心律失常时，豚鼠心脏舒张压显著升高且收缩压下降，表现负性肌力的毒性作用。因此，心功能下降是蟾酥心脏毒性的一种表现，常发生于早期心律失常之后，是中毒进一步恶化且致死性的表现。

强心苷能直接抑制心肌 Na+/K+-ATPase，使Na+从心肌排除减少，通过Na+/Ca2+交换引起胞内Ca2+超载，诱发瞬间性内向离子流，以及减少细胞内K+，使最大舒张电位与阈电位的距离缩小，引起心律失常等反应［8－9］。蟾酥中毒时，可能以类似方式改变心肌电生理，通过抑制钠泵减少K+摄入，造成心肌提前去极化，引起舒张压升高，表现为心肌不能有效“休息”;另一方面，持续的钙超载，可能使心肌对钙离子的敏感性下降，收缩压下降，毒性表现为心肌的“收缩乏力”。以往研究显示，毒性剂量蟾酥引起小鼠剧烈抽搐和角弓反张，表现出急性神经毒性［2］。文献曾报道，强心苷能间接兴奋迷走神经并抑制交感神经，使房室传导减慢;吗啡或脊髓切断能显著降低地高辛的心脏毒性，说明强心苷可通过神经系统加剧其心脏毒性［9］。

表2 蟾酥对豚鼠心功能的影响Tab.2 Effect of Chansu on cardiac function in guinea-pigs

综上所述，致死量蟾酥可诱导豚鼠出现心律失常，随心律失常的发生，蟾酥的强心效应转变为抑制心功能的毒性作用。

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