经肝动脉移植hUCMSCs对失代偿期肝硬化患者血清PA及CHE的影响

杜永国，何 晶，周 云，周贵忠，林 洪，贺东平，何秀清，胡 祥，李伟林

(1海南省农垦总医院，海口570311;2深圳市北科细胞工程研究所)

失代偿期(Child B或C级)肝硬化患者的肝脏合成、解毒能力等显著下降，提高其正常肝细胞数量是解决终末期肝功能衰竭的关键。近年来，干细胞肝移植在终末期肝硬化临床治疗中取得一定成果，但脐带间充质干细胞(hUCMSCs)对失代偿期肝硬化患者肝脏储备功能的影响目前鲜见临床报道。2009年1月～2010年12月，我们观察了经肝动脉移植hUCMSCs对失代偿期肝硬化患者血清前白蛋白(PA)及胆碱酯酶(CHE)的影响。现报告如下。

1 资料与方法

1.1 临床资料 同期于我院住院的失代偿期肝硬化患者50例，男41例，女9例;年龄29～67岁，平均53岁。诊断均符合2000年病毒性肝炎防治方案诊断标准［1］，其中乙型肝炎肝硬化45例、丙型肝炎肝硬化5例。将50例患者随机分治疗组及对照组各25例，其一般资料具有可比性。

1.2 治疗方法 两组均予常规护肝及抗肝纤维化治疗。治疗组在此基础上经肝动脉移植hUCMSCs:患者术前1 d做碘过敏试验、双侧腹股沟备皮，X线透视下经股动脉插管至肝固有动脉，注射造影剂，观察肝内血管情况及有无占位病变，经插管注入hUCMSCs悬液1 ml(深圳市北科细胞工程研究所提供，镜下干细胞数达1.0×107～108/ml)，穿刺点加压包扎，术后8 h插管侧髋关节限制活动，卧床休息24 h，进行肝动脉导管治疗后常规护理;间隔半个月后再行第2次hUCMSCs输注。

1.3 相关指标观察 ①血清PA及CHE:两组均于治疗前及治疗后2、4、6、8周分别抽取空腹静脉血，采用免疫透射比浊法检测血清PA及CHE。②观察不良反应发生情况。

1.4 统计学方法 采用SPSS13.0软件进行统计学处理。计量数据以±s表示，行t检验，检验水准α=0.05。

2 结果

2.1 血清PA及CHE 两组不同时间点血清PA见表1，血清CHE见表2。

表1 两组不同时间点血清PA比较(n=25，mg/L，±s)

表1 两组不同时间点血清PA比较(n=25，mg/L，±s)

组别 治疗前 治疗第2周 治疗第4周 治疗第6周 治疗第8周治疗组 25.17±11.76 37.42±12.11 49.33±10.69 66.63±13.01 83.57±18.16对照组 24.21±12.31 36.63±14.57 47.94±16.53 56.07±14.77 60.02±15.34 t值 0.282 0.208 0.353 2.682 4.953 P值 ＞0.05 ＞0.05 ＞0.05 ＜0.05 ＜0.01

表2 两组不同时间点血清PA比较(n=25，U/L，±s)

表2 两组不同时间点血清PA比较(n=25，U/L，±s)

组别 治疗前 治疗第2周 治疗第4周 治疗第6周 治疗第8周治疗组 1 764.6±670.9 2 170.5±591.8 2 506.7±633.1 2 801.1±701.4 3 176.5±721.3对照组 1 806.3±593.4 1 931.5±601.1 2 198.8±587.6 2 306.7±650.2 2 501.5±657.4 t值 0.236 0 1.416 6 1.782 3 2.584 6 3.458 2 P值 ＞0.05 ＞0.05 ＞0.05 ＜0.05 ＜0.01

2.2 不良反应 均无过敏、消化道症状加重、肝区疼痛、出血等并发症发生，仅治疗组术后1例出现轻度发热(体温37.8℃)。

3 讨论

晚期肝病的治疗临床主要以保肝、对症及预防并发症为主，其中终末期肝病的治疗总体效果不佳。近年来，肝移植已成为终末期肝病最理想的治疗选择，但供体紧缺、移植后免疫排斥反应及高额治疗费用等限制了其临床应用。hUCMSCs是具有自我更新和分化能力的细胞，其增殖及定向分化具有巨大应用潜能。国内外动物试验均证实hUCMSCs具有诱导分化为肝脏细胞的能力，且具备肝细胞功能和作用，已成为细胞生物学及整个生命科学的研究热点。研究表明，间充质干细胞是一种多潜能干细胞，不仅支持造血系统，还可向中胚层和外胚层来源的组织细胞分化，在一定实验条件控制下可分化为肌细胞、成骨细胞、脂肪细胞、神经细胞、肝细胞、心肌细胞等［2，3］。高蕾等发现，hUCMSCs 能向肝细胞分化［4］，且来源广泛、采集方便、无伦理学问题。

白蛋白(Alb)与PA均在肝脏合成，其中Alb半衰期较长，肝脏停止合成Alb后8 d外周血Alb浓度仅降低约20%，故血清Alb检测不能敏感地反映早期肝脏损害;PA半衰期较短(约1.9 d)，其在肝脏受损、肝脏合成能力下降或肝脏修复、合成能力提高时均可迅速于外周血中检测出来，可作为反应肝脏合成能力及储备能力的指标［5］。CHE亦称假性胆碱脂酶，是由肝脏合成后释放到血液的非特异性脂酶，存在于肝、胰、子宫、中枢神经白质等处，是血浆固有酶。CHE半衰期约为10 d，能敏感而特异性反映肝脏合成代谢功能，其水平检测是评价肝细胞合成蛋白功能的灵敏指标［6］。本研究显示，治疗后6、8周治疗组血清PA及CHE均显著高于对照组。提示经肝动脉输注hUCMSCs可显著提高失代偿期肝硬化患者的近期肝脏合成、储备功能。可能机制为hUCMSCs在肝内可转化为肝细胞，并发挥肝细胞作用，同时刺激并促进原位肝细胞生长。

综上所述，经肝动脉移植hUCMSCs可显著改善失代偿期肝硬化患者近期肝脏合成、储备功能;远期效果尚需进一步研究观察。

［1］中华医学会传染病与寄生虫病分会、肝病学分会.病毒性肝炎防治方案［J］.中华肝脏病杂志，2000，8(1):324-329.

［2］Erices A，Conget P，Minguell JJ，et al.Mesenchymal progen-itor cels in human umbilical cord blood［J］.Br J Haematol，2000，109(1):235-242.

［3］Lee OK，Kuo TK，Chen WM，et al.Isolation of multpotent mesenchymal stem cells from umbilical cord blood［J］.Blood，2004，103(5):1669-1675.

［4］高蕾，刘吉勇，裴庆山，等.人脐血间充质干细胞向肝细胞样细胞的分化［J］.山东大学学报(医学版)，2008，46(12):1141-1144.

［5］张成义，齐承义，印永红，等.12种血浆蛋白在肝炎、肝硬化中临床意义的比较［J］.安徽医学，1992，13(6):6-8.

［6］张卫卫，王学清，李岩.血清前白蛋白、胆碱酯酶对判断肝硬化患者肝储备功能及预后的临床价值［J］.中国实用内科杂志，2002，22(11):673-674.