重组蛋白TATm-Survivin(T34/117A)对乳腺癌细胞周期变化与凋亡的影响

康燕燕 唐莉莉 石磊 陈海龙 林南静 马兴元

华东理工大学生物工程学院应用生物学系，上海 200237

重组蛋白TATm-Survivin(T34/117A)对乳腺癌细胞周期变化与凋亡的影响

康燕燕 唐莉莉 石磊 陈海龙 林南静 马兴元

华东理工大学生物工程学院应用生物学系，上海 200237

背景与目的：Survivin是一个抗凋亡、促增殖的双功能基因，且高表达于多种恶性肿瘤和转化组织中，使其成为抗肿瘤药物研究的新靶点。本研究观察经点突变的重组蛋白药物TATm-Survivin(T34/117A)处理乳腺癌细胞B-Cap-37后，对乳腺癌细胞B-Cap-37细胞周期和增殖的影响，检测其对癌细胞促凋亡且抑制增殖的药效并初步探讨其分子机制。方法：重叠PCR法在TATm-Survivin(T34A)基因上引入突变位点Thr117→Ala117，MTT法检测细胞增殖；流式细胞术分析细胞凋亡和细胞周期及线粒体膜电位变化；Western blot检测Aurora B激酶底物Histone H3的磷酸化水平和Caspase-3激活情况。结果：TATm-Survivin(T34/117A)蛋白对B-Cap-37细胞的增殖有显著的抑制作用；作用24 h后，细胞被阻滞在G0/G1期，G0/G1期细胞由对照组的(54.1±6.1)%显著增加到(62.7±5.1)%(P＜0.05)，作用48 h后，细胞被阻滞在G2/M期，G2/M细胞由对照组的(16.6±8.9)%显著增加到(24.0±6.0)%；Aurora B激酶活性通过Histone H3的磷酸化水平间接反映，蛋白药物处理48 h后p-Histone H3的灰度值由对照组的100%降低到89.8%(P＜0.05)；48 h时，细胞线粒体膜电位由对照组的(649.9±8.0)%显著降低到(582.9±15.6)%(P＜0.05)；细胞凋亡率由对照组的(4.6±0.7)%显著增加到(42.7±0.5)%(P＜0.01)，与对照相比，不同浓度的重组蛋白均激活了Caspase-3。结论：重组蛋白TATm-Survivin(T34/117A)对乳腺癌B-Cap-37具有抑制增殖、促凋亡作用，其与降低Aurora B激酶的活性，并激活Caspase-3相关。

TATm-Survivin(T34/117A)； 点突变； 乳腺癌； 周期阻滞； 凋亡

Survivin是哺乳动物细胞中凋亡抑制因子(inhibitor of apoptosis protein，IAP)家族最小的成员，高表达于原发性乳腺癌和结肠癌等多种肿瘤细胞中，但在正常细胞和组织中却很少能检测到［1-2］。……