二色补血草硫氧还蛋白过氧化物酶基因LbTPx的克隆及其表达1)

刁桂萍 杨传平 王玉成

(东北林业大学，哈尔滨，150040)

二色补血草(Limonium bicolor)属蓝雪科补血草属，2年生草本植物，是我国北方的一种重要牧草资源。它能在pH值8.5～9.0的碱性土壤中正常生长，是一种泌盐植物，具有较强的抗盐能力，不必改良土壤即可直接种植，是进行植物耐盐碱基因克隆的理想材料之一［1］。

有氧环境下，各种生物的代谢产物中普遍含有活性氧(ROS)。ROS能与蛋白质、脂类和DNA反应，分别引起酶活降低、膜透性增强及突变增加［2］。ROS一旦超出了植物的清除能力，会造成植物体氧化损伤［3］。近来认为硫氧还蛋白过氧化物酶(TPx)可能是ROS代谢中未被发现的重要环节。TPx属于过氧化物酶超家族(Prx)中的一员，广泛存在于原核和真核生物体中。它以硫氧还蛋白作为电子供体去除机体内的活性氧类物质(ROS)，不仅具有强大的抗氧化功能，而且在维持机体氧化还原平衡、细胞凋亡、增殖等方面都具有调节作用［4－6］。本文克隆了二色补血草的 LbTPx基因，对该基因的序列进行了分析，并用实时定量RT－PCR分析了该基因在NaCl、CdCl2、CuSO4、ZnCl2和 ABA 等 5 种胁迫下不同时间的表达情况。

1 材料与方法

1.1 二色补血草LbTPx基因的克隆及序列测定

已构建了0.4 mol/L NaHCO3胁迫下的二色补血草叶片及嫩茎的cDNA文库，通过对文库克隆的随机测序和EST分析获得LbTPx基因的全长cDNA序列。采用NCBI的开放读码框寻找程序，确定该基因的开放读码框;用NCBI的Conserved Domains工具(http://www.ncbi.nlm.nih.gov/Structure/cdd/wrpsb.cgi)预测蛋白的保守区;通过 ExPASY网站(http://www.expasy.org/tools/pi_tool.html)计算蛋白的相对分子质量和理论等电点;用BlastP程序进行同源性搜索，并对具有同源性、不同植物来源的TPx蛋白用ClustalX(1.83)进行多序列比对。……