DIGFA-kit和IEST检测人、鼠斯氏狸殖吸虫抗体的研究*

朱名胜,朱 敬,王绍基,宋明华

斯氏狸殖吸虫病(Pagunogonimiasis skrjabini)的病原体为斯氏狸殖吸虫(Pagumogonimus skrjabini),是在中国广泛分布,危害严重的食源性寄生虫病。湖北省十堰市曾在蟹体内查出斯氏狸殖吸虫囊蚴,在猫、犬体内也检出过斯氏狸殖吸虫成虫[1],因当地居民有饮生水和食生蟹的习惯,斯氏肺吸虫病病人时有发现[2]。由于人体为该虫的非正常宿主,感染后导致“幼虫移行症”引起多组织、器官的损害,严重危害其身体健康[3-4],该病临床表现复杂多样,常被误诊、误治。为了探索较简易的血清学诊断方法,作者采用肺吸虫病金标渗滤试剂盒(DIGFA-kit)和免疫酶染色试验(IEST)对流行区人群和斯氏狸殖吸虫感染鼠血清进行特异性抗体检测,比较二者的敏感性和特异性。

1 材料与方法

1.1 试剂盒 肺吸虫病抗体快速检测(金标渗滤法)试剂盒(浙江省医学科学院提供)。

1.2 血清样本 斯氏狸殖吸虫病流行区湖北省十堰市居民血清1 062份,感染斯氏狸殖吸虫90d大鼠血清40份(每鼠感染囊蚴30个),感染旋毛虫50d大鼠血清34份,感染日本血吸虫40d家兔血清30份,蛔虫病人血清28份,健康大鼠血清40份。其中40只实验大鼠感染后每周心脏穿刺取血1次,分离血清备用。

1.3 冰冻切片抗原制备 剖杀经人工感染斯氏狸殖吸虫 3个月的犬,从肺虫囊中收集成虫,用0.01mol/L pH7.4 PBS(含 0.05%Tween20)冲洗后,冰冻切片,厚度 6μ m,每张载玻片裱贴5块抗原片,经丙酮固定后,-20℃保存备用。

1.4 试验方法

1.4.1 DIGFA 取试剂盒置一平面上,加洗脱液1滴(100μL),使加样孔上 NC 膜湿润;加待检血清25μL,待渗入;加洗脱液 1 滴(100μL),洗去未结合抗体;加胶体金-羊抗人IgG标记物1滴(100μL),待渗入;加洗脱液2滴(200μL),渗入后肉眼判断结果。……