乙肝五项指标与荧光定量PCR检测血清HBV-DNA含量联合运用

吕世琪，张金良，闫 奇

(安徽省阜阳市第五人民医院检验科，安徽 阜阳 236037)

目前临床常用ELISA法进行乙肝五项的检测和用荧光定量PCR法进行HBV-DNA的定量检测来判断HBV病毒的感染或复制情况。我们应用荧光定量PCR技术对450份血清标本在一周内进行HBV-DNA的检测，并采用ELISA法进行对照检测，结果分析如下。

1 材料与方法

1.1 实验对象 450例患者血清均来自阜阳市第五人民医院2011年1月至2011年6月门诊及住院病人 ，其中男性323例，女性127例，年龄10～70岁。按乙肝五项不同模式，将HBsAg(+)/HBeAg(+)/HB-cAb(+)为第一组，HBsAg(+)/HBeAb(+)/HBcAb(+)为第二组，HBsAg(+)/HBcAb(+)为第三组，HBsAb(+)/HBeAb(+)/HBcAb(+)为第四组，HBcAb(+)为第五组，HBsAg(-)/HBsAb(-)/HBeAg(-)/HBeAb(-)/HBcAb(-)，乙肝五项全阴为第六组。

1.2 实验方法

1.2.1 HBV-DNA定量 分析，FQ-PCR检测HBVDNA试剂盒为中山大学达安基因股份有限公司，测定仪器 为中山大学达安基因股份有限公司的DA7600荧光定量PCR仪。 严格按试剂盒说明进行操作，采用常规的高温裂解法，从血清中提取HBV-DNA，同时做阴性、临界阳性、强阳性质控品。标准参照品均由试剂盒配置，HBV阳性定量参考品：1.0×104IU/ml/管、1.0×105IU/ml/管、1.0×106IU/ml/管、1.0×107IU/ml/管，取上清液 2μl加入 FQ-PCR 反应管，按下列条件进行扩增，93℃ 2min，然后按93℃45s～55℃ 60s 10 个循环，93℃ 30s～55℃ 45s 30 个循环。反应结果由仪器自动分析，直接由电脑得出血清标本 的乙肝病毒拷贝数。正常参考值为＜1.00×103拷贝/ml。

1.2.2 乙肝五项物采用ELISA法测定，试剂盒购自上海荣盛生物技术公司。操作严格按试剂盒说明书进行。

2 结果

乙肝五项不同组合状态血清HBV-DNA含量比较结果显示，第一组患者血清HBV-DNA阳性率为 94.9%，HBV-DNA平均含量为 4.51×107copies/ml，第二组患者血清HBV-DNA阳性率为64%，平均含量为2.42×105copies/ml，第三组患者HBV-DNA阳性率为58%，平均含量为4.25×104copies/ml，第四组HBV-DNA阳性率为5%，平均含……