隐孢子虫P23基因的原核表达及间接ELISA检测方法的建立

张国恩，米荣升，苏庆美，黄 燕，周 鹏，胡义彬，秦培兰，呼高伟，陈兆国

（中国农业科学院上海兽医研究所 农业部动物寄生虫学重点开放实验室 中国农业科学院动物源性食品安全研究中心，上海 200241）

隐孢子虫病（cryptosporidiosis）是由食源性寄生原虫隐孢子虫（Cryptosporidium spp.）感染胃和肠粘膜上皮细胞引起的人兽共患寄生虫病，主要导致人和动物的自限性水样腹泻，还会引起患者慢性狭窄性小肠结肠炎（Crohn's disease）[1]，对于免疫功能低下的病人特别是艾滋病（AIDS）患者会造成长期感染甚至会有生命危险。隐孢子虫之所以对人和动物造成重大危害，其原因主要有：常规消毒剂均无法完全灭活隐孢子虫卵囊；感染剂量低，一个卵囊就可能造成感染；对免疫功能低下的人和动物具有致死性；该病为人兽共患病，不仅影响人类健康，还对畜牧业的发展造成很大的危害[2]。隐孢子虫病日益受到国内外学者的重视，但至今尚无治疗或免疫预防隐孢子虫感染的有效方法[3]。目前主要通过加强管理和卫生措施、隔离患病动物，来减少疾病的传播。因此，对本病的准确诊断显得极其重要。

对隐孢子虫病的常规诊断技术是基于粪便镜检的病原学检测方法。该方法对实验条件要求简单，但检出率不高，很容易错检、漏检[4]。近年来出现的诸多分子生物学检测技术，如PCR、nested PCR、PCR-RFLP、RT-PCR和q-PCR，虽然敏感性很高、特异性也很强，但技术难度大，实验条件高，且费用较高，只能在科研单位和实验室条件下开展检测，难以在养殖现场推广应用[5-7]。……