乳腺癌中E-cadherin和BCA-225蛋白表达与预后的相关性研究

汤永峰 谢莉莉

(1.南京医科大学附属南京市妇幼保健院病理科 南京 210004； 2.南通体臣卫生学校医技系 南京 210000)

上皮粘附素(E-cadherin)表达于绝大多数上皮细胞表面,尤以细胞连接处最为集中,是上皮细胞表面最重要的细胞间粘附分子之一。它通过介导同型细胞间的粘附反应,维持上皮组织结构的完整性和细胞的极性,具有细胞接触性生长抑制功能,防止细胞的相互分离,是典型的某些类型肿瘤形成/浸润抑制因子。乳腺癌抗原(breast cancer antigen-225,BCA-225)是乳腺癌细胞株T47D分泌的一种糖蛋白,分子量为225KDa,通常乳腺腺癌表达此种蛋白[3]。本研究联合检测E-cadherin及BCA-225蛋白在乳腺癌中的表达,分析它们与乳腺癌患者临床病理特征的关系,以及这二者的表达水平与乳腺癌患者的预后关系。

1 材料与方法

1.1 标本

由南通大学附属医院病理科提供80例2004年2月至2005年12月期间手术切除标本,均为女性。其中乳腺良性肿瘤10例。原发性乳腺癌70例,均为乳腺浸润性导管癌。原发性乳腺癌患者年龄为30～72岁,平均50.7岁。乳腺癌病理分级I级20例,II级26例,III级24例。按国际抗癌联盟(UICC)提出的TNM国际分期标准,I期22例,II期28例,III期20例。无淋巴结转移39例,淋巴结转移数目＜4个的13例,≥4个的18例。肿瘤最长径≤5cm的61例,＞5cm的9例。雌激素受体(estrogen receptor,ER)阴性39例,阳性31例。孕激素受体(progesterone receptor,PR)阴性37例,阳性33例。术后随访到45例病人,失访25例,随访率64.29%,随访截止日期2008年11月30日,生存期的计算从手术日期到随访截止日期,或因复发、转移而死亡的日期为止,随访最长时间57个月,最短时间36个月,平均生存时间45.33个月,随访病例3年生存率为88.89%。患者术前均未接受放疗、化疗或内分泌治疗。

1.2 试剂

鼠抗人E-cadherin即用型单克隆抗体(MAB-0589;Clone:A42C7),鼠抗人BCA-225即用型单克隆抗体(MAB-0175;Clone:CU18),二步法免疫组化检测试剂盒均购于福州迈新公司。

1.3 方法

按SP试剂盒操作说明书进行。石蜡切片脱蜡水化,按要求抗原修复,免疫组化染色,DAB显色,苏木精复染。PBS代替一抗作阴性对照。

1.4 结果判断

E-cadherin蛋白表达以细胞膜及细胞质出现棕黄色染色颗粒为阳性,但以细胞膜为主。BCA-225蛋白表达以细胞质出现棕黄色颗粒为阳性。每张切片选5个高倍视野(200倍),按肿瘤阳性细胞率和着色强度分别进行计分:(1)按阳性细胞百分率:0分为≤5%,1分为6%～25%,2分为26%～50%,3分为51%～75%,4分为>75%;(2)按着色计分:分为4个等级,0分为无着色,1分为淡黄色,2分为黄色,3分为棕黄色。两者乘积0分为(-),1～4分为(+),5～8分为(++),9～12分为(+++)。为临床及统计分析的目的,将(-)和(+)归为低表达,(++)和(+++)归为高表达[1]。

1.5 统计学处理

经统计分析软件STATA 7.0分析。各组数据间比较采用χ2检验和四格表确切概率法。用Spearman等级相关分析判定相关性。Kaplan-Meier法描述生存曲线、Log-rank法进行差别显著性检验、Cox比例风险回归模型作为多因素的生存分析。P＜0.05认为差异有统计学意义。

表1 乳腺癌中E-cadherin、BCA-225蛋白表达与临床病理特征的关系

图1 E-cadherin表达的Kaplan-Meier生存曲线分析

2 结果

2.1 E-cadherin的表达

在乳腺浸润性导管癌与良性病变组织中,E-cadherin蛋白阳性均定位于癌细胞及导管上皮细胞膜和细胞质上,着色深浅不一,呈片状、灶状或散在分布。E-cadherin表达在对照组与乳腺浸润性导管癌组织中的差异有统计学意义。E-cadherin蛋白表达与乳腺癌患者的ER、PR及人类表皮生长因子受体2(human epidermal growth factor receptor 2,Her-2)无相关性,与临床分期、病理分级、肿瘤大小和淋巴结转移相关，见表1。

2.2 BCA-225的表达

在乳腺浸润性导管癌中,BCA-225蛋白阳性主要定位于癌细胞质中,着色深浅不一,呈片状、灶状或散在分布。BCA-225表达在对照组与乳腺浸润性导管癌组织中的差异有统计学意义。BCA-225蛋白表达与乳腺癌患者的ER、PR、TNM分期、淋巴结转移和肿瘤大小均无相关性,而与肿瘤病理分级及癌基因Her-2相关，见表1。

2.3 E-cadherin与BCA-225蛋白在乳腺癌中表达的相关性

在31例BCA-225蛋白低表达组中,E-cadherin蛋白低表达17例,高表达14例;39例BCA-225蛋白高表达组中,E-cadherin蛋白低表达25例,高表达14例;spearman相关分析提示两者无相关性(r=-0.0307,P＞0.05)。

2.4 乳腺癌中E-cadherin和BCA-225蛋白不同表达水平对预后影响的分析

对E-cadherin和BCA-225蛋白表达情况与生存率的关系进行Kaplan-Meier生存曲线分析,结果显示E-cadherin高表达患者的生存率明显高于低表达者,2组比较差异有统计学意义(χ2=6.01,P<0.05)。而BCA-225蛋白表达情况在此分析中差异无统计学意义(χ2=0.26,P>0.05)(图1、2)。

图2 BCA-225表达的Kaplan-Meier生存曲线分析

将肿瘤病理分级、腋淋巴结状态及E-cadherin、BCA-225蛋白表达的情况共4种因素进行Cox比例风险回归多因素的生存分析,结果显示E-cadherin蛋白表达有独立的预后意义,风险度exp为-1.795954(P<0.05)。

3 讨论

E-cadherin是钙依赖性细胞间连接的细胞粘附分子,当E-cadherin活性正常时,肿瘤细胞不易从原发灶上脱落下来,而E-cadherin失活导致细胞间粘附作用下降和极性紊乱,促使肿瘤转移,即E-cadherin是一种癌侵袭、转移的抑制因子。

实验结果显示E-cadherin在乳腺良恶性肿瘤中的表达差异显著,其表达随着TNM分期的增高、病理分级级别的增高、肿瘤增大及淋巴结转移数目的增多而下降,单因素和多因素分析显示E-cadherin是乳腺癌患者独立的预后指标。与PARK等[2]学者的报道一致。提示E-cadherin表达缺如或下调是乳腺癌浸润性增加、转移能力增强的一个指征,是乳腺癌重要的预后因子,可作为筛选术后复发转移高危人群的有效指标。关于E-cadherin在乳腺癌中表达下调或缺失的机制,有学者报道E-cadherin的基因突变,转录和翻译异常[3～4],可以抑制E-cadherin在乳腺癌中的正常表达,导致乳腺癌的发生。另外,E-cadherin的甲基化、糖基化、NF的影响、雌孕激素及E-cadherin介导的黏附复合体功能异常等均可导致乳腺组织中E-cadherin的异常表达,从而导致乳腺癌的发生。

BCA-225是乳腺癌细胞株T47D分泌的一种糖蛋白,分子量为225KDa,通常乳腺腺癌表达此种蛋白。目前,关于BCA-225的研究主要集中在该蛋白对各个系统转移或异位肿瘤的鉴别诊断上[5～6]。但关于BCA-225与乳腺癌临床病理特征的关系目前国内外少有报道。

实验结果显示BCA-225蛋白表达随着病理分级级别的增高而增加,在癌基因Her-2阳性组中BCA-225表达高于其阴性组,病理分级代表着肿瘤的分化程度,是传统的预后指标,又因为癌基因Her-2是乳腺癌患者可靠的预后指标[7],推测BCA-225对判断患者的预后可能有一定的参考价值。但单因素和多因素分析显示BCA-225表达与乳腺癌患者术后生存状况均无相关性。

上述结果表明,E-cadherin在乳腺癌发生发展、浸润和转移过程中起重要作用,检测E-cadherin的表达对乳腺癌患者预后的评估有重要意义,并且可为乳腺癌患者的鉴别诊断和基因治疗提供理论根据。BCA-225作为乳腺癌患者独立的预后评价指标还尚待进一步深入探讨。

[1]翁密霞,吴翠环,杨秀萍.E-cadherin,CD44v6和PCNA在非小细胞肺癌组织中的表达及意义[J].癌症Chinese Journal of Cancer,2008,27(2):191～195.

[2]Park,Daehoon,Karesen,et al.Expression pattern of adhesion molecules (E-cadherin,[alpha]-,[beta]-,[gamma]-catenin and claudin-7),their influence on survival in primary breast carcinoma,and their corresponding axillary lymph node metastasis[J].APMIS,2007,115(1):52～65.

[3]Masciari S,Larsson N,et al.Germline E-cadherin mutations in familial lobular breast cancer[J].Journal of Medical Genetics,2007,44(11):726～731.

[4]Vesuna F,van Diest P,Chen JH,et al.Twist is a transcriptional repressor of E-cadherin gene expression in breast cancer[J].Biochem Biophys Res Commun,2008,367(2):235～241.

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[6]Yin C, Chapman J.Invasive mucinous (colloid)adenocarcinoma of ectopic breast tissue in the vulva: a case report[J].Breast J,2003 Mar-Apr,9(2):113～115.

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