ICOS/ICOSL逆向信号诱导成熟过程中树突状细胞特异性分泌TGF-β1

唐古生 张薇薇 吴 君 沈 茜 (第二军医大学附属长海医院实验诊断科,上海 200433)

可诱导共刺激分子(ICOS)的配体(ICOSL)主要表达于B细胞、DCs、单核细胞和内皮细胞上,我们及其他研究者研究结果均表明随着DCs成熟,DCs表面ICOSL的表达量逐渐下调,其机制可能和ICOSL的胞外区剪切脱落有关[1-3]。那么,与不成熟DCs类似[1],ICOS在DCs成熟过程中或在DCs成熟后能否通过表达逐渐下调的ICOSL向成熟的DCs传递逆向信号并调控DCs的功能?本部分研究中我们在体外诱导DCs成熟的同时加用ICOSIg,着重观察ICOS在DCs成熟过程中能否向DCs传递反向信号、调节DCs功能状态。

1 材料与方法

1.1 实验动物 C57BL/6小鼠(H-2b),雌性,4～8周龄用于体外DCs诱导培养;4～8周龄的BALB/c小鼠(H-2d),雌性或雄性,用于获取混合淋巴细胞实验中效应CD4+T细胞,均购于上海必凯实验动物有限公司。OVA蛋白特异性小鼠(DO11.10)与C57BL/6杂交子一代小鼠(4～8周龄),由本校免疫学研究所曹雪涛教授惠赠,用于课题中抗原特异性相关研究。所有实验小鼠的使用均获得本校动物中心伦理委员会的批准,在第二军医大学实验动物中心SPF清洁级环境中饲养。

1.2 小鼠骨髓来源成熟DCs诱导培养及表型检测体外诱导培养、纯化第5天不成熟DCs详细方案参照文献[1],纯化后按不同实验组处理,处理过程中加入不同浓度LPS诱导DCs成熟。部分实验中用mouse-CpG刺激。

1.3 上清液细胞因子检测 各实验组处理后,收集细胞培养上清,用相应ELISA试剂盒分别检测细胞因子 IL-2、IL-4、IL-6、IL-10、IL-12、IFN-γ、TNF-α和TGF-β1含量,按照实际细胞因子的表达量决定是否进行适当稀释,具体做法参见试剂盒说明书。检测DCs IL-4表达量时,纯化后的DCs细胞继续培养过程中不加重组IL-4。……