TRAIL对肿瘤侵润CD4+CD25+Treg的调节作用①

袁海芹 刁智娟 周剑锁 刘彦信 史 娟 郑德先

(中国医学科学院基础医学研究所北京协和医学院基础学院,北京 100005)

肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(Tumor necrosis factor-related apoptosis-inducing ligand,TRAIL)是TNF超家族成员之一,与其死亡受体结合能诱导多种肿瘤细胞发生凋亡,而对大多数正常细胞无毒副作用[1,2]。从发现TRAIL至今已有15年的时间,研究主要集中于TRAIL抗肿瘤的功能及其诱导细胞凋亡的机制等。但现有结果表明,TRAIL和TRAIL受体除了诱导细胞凋亡以外,还有更为复杂的生理功能和免疫功能。我们前期研究发现TRAIL及其受体可介导一系列炎性细胞因子的释放,而近年来大量研究表明炎症细胞及其分泌的炎症因子组成的肿瘤微环境,对肿瘤细胞的发生、进展、恶变、侵润以及转移发生重要作用[3,4]。TRAIL引起的炎症因子的释放在肿瘤微环境中发挥何种作用还不清楚。本研究探讨对TRAIL耐受的肿瘤细胞在肿瘤微环境中可能存在的逃逸机制,希望通过对TRAIL生理功能的研究,来讨论TRAIL在肿瘤微环境中发挥的作用,为肿瘤治疗提供新的依据。

1 材料与方法

1.1 试剂及细胞 小鼠乳腺癌细胞4T1购于美国ATCC,小鼠黑色素瘤细胞B16购于中国医学科学院基础医学细胞中心。重组可溶性TRAIL(rsTRAIL)为本实验室制备,采用ToxinEraserTMEndotoxin Removal Kit(购于GenScript公司),去除内毒素。BALB/c小鼠购于中国医学科学院实验动物科学研究所。胶原酶Ⅳ购于Sigma公司。APC标记的抗鼠CD25和PE标记的抗鼠CD4抗体复合物购于eBioscience公司。

1.2 MTT检测细胞活性 待细胞培养至对数生长期,收集细胞,稀释成合适浓度的细胞悬液,加到96孔细胞培养板,每孔1×104个细胞/100 μ l,再培养8小时待细胞贴壁。……