三种奥硝唑PLGA缓释制剂体外释放度的比较*

刘 霞

(南开大学附属口腔医院，天津 300041)

奥硝唑为一种继甲硝唑、替硝唑之后的第三代新型硝基咪唑类衍生物，具有良好的抗厌氧菌作用，具有抗菌、镇痛、消炎及促进溃疡愈合作用。聚乳酸(PLA)是一种生物降解高分子材料，但存在亲水性能差等不足缺点。因此，近年来使用各种PLA的亲水改性研究日渐深入，尤其是利用羟基脂肪酸-乙醇酸(GA)合成共聚物聚(乳酸-乙醇酸，PLGA)的研究。牙周袋给药系统是将制剂置于牙周袋中,药物直接作用于靶器官(牙周组织)的一种制剂方式。药物从固体制剂中释放的速度和程度，在一定程度范围内反应了药物的吸收情况。通常采用的体外释放度测定方法来反映牙周袋给药系统的体内释药情况。为全面考查奥硝唑-PLGA缓释制剂质量，本实验对其释放度的测定方法进行了探讨，并对3种奥硝唑-PLGA缓释制剂释放度进行比较。

1 仪器与试药

1.1仪器 AX200电子天平(日本岛津公司)，W201F 型恒温水浴锅(上海申生科技有限公司)，DGG-101-2型电热鼓风干燥箱(天津市天宇实验仪器有限公司)，DZG-401型电热真空干燥箱(天津市天宇实验仪器有限公司)，HZS-H型水浴振荡器(哈尔滨市东联技术开发有限公司)，XS-212光学显微镜(南京江南光电股份有限公司)，2XZ-2型旋片式真空泵(浙江黄岩求精真空泵厂)，FINNPIPETTE型可调式移液器(上海热电仪器有限公司)，FD-1型冷冻干燥机(北京博医康实验有限公司)，KDC-160HR高速冷冻离心机(科大创新股份有限公司中佳分公司)，UV-2450紫外分光光度计(苏州岛津工厂)，DF-101S型集热式恒温加热磁力搅拌仪(巩义市英峪予华仪器厂)。

1.2试药 奥硝唑(药用，湖南九典制药有限公司)，无水乙醇(分析纯，天津市化学试剂六厂)，聚乙烯醇(PVA，1788，上海金树脂粉末有限公司)，二氯甲烷(分析纯，天津大学科威公司)，CMC-Na(药用，淮南山河药用辅料有限公司)，海藻酸钠(分析纯，上海天莲精细化工有限公司)，淀粉(食用，天津中英保健食品有限公司)，PLGA (75∶25，Mw: 2200，自制)，磷酸二氢钾(分析纯，天津大学科威公司)，氢氧化钠(分析纯，天津大学科威公司), 纯化水(分析纯,天津市南开区纯水供应站)。

2 实验方法与结果

2.1奥硝唑缓释微球、膜剂、棒剂的制备

2.1.1奥硝唑缓释微球的制备——液中干燥法 PVA溶液的配制：精密称取PVA 1.500 g放入锥形瓶，加50 ml纯化水95 ℃电热磁力搅拌加热至全部溶解，得到浓度为3%的PVA溶液备用。

量取50ml上述已配制的PVA溶液(0.03 g/ml)放入200 ml的烧杯中备用，将400 mg PLGA溶解于10 ml有机溶媒二氯甲烷中，将奥硝唑加入上述有机相中，搅拌至溶解，将该乳液迅速加入到上述PVA水溶液中，以1 000 r/min搅拌30 min，再在室温下以800 r/min的速度搅拌4 h，使二氯甲烷完全挥发，用纯化水洗4～5次除去微球表面粘连的PVA及未被包封的奥硝唑，离心、冻干、收集微球。

2.1.2奥硝唑缓释膜剂、棒剂的制备

2.1.2.1处方 奥硝唑0.15 g，羧甲基纤维素钠0.30 g，海藻酸钠0.20 g，淀粉0.15 g，PLGA 0.20 g，二氯甲烷0.50 ml，纯化水适量。

2.1.2.2奥硝唑缓释膜剂的配制方法 将海藻酸钠加入10 ml纯化水中充分溶胀得A液，将PLGA加入二氯甲烷中，40 ℃水浴加热至溶解，待冷至室温后加入CMC-Na、淀粉、奥硝唑即得B液，将A液加入B液中，充分搅拌，混匀，静置。待气泡除尽后涂膜，50 ℃干燥，脱膜，分割成所需大小的膜片(每片约含奥硝唑1 mg)，在紫外灯下照射15 min灭菌，密封包装。

2.1.2.3奥硝唑缓释棒剂的配制方法 按上述方法，将静置后的溶液气泡除尽后，加入20 ml针管中，挤出得棒状物，50 ℃干燥，分割成所需大小的棒剂(每棒约含奥硝唑1 mg)，在紫外灯下照射15 min灭菌，密封包装。

2.2奥硝唑含量测定方法的建立

2.2.1奥硝唑检测波长的确定 配制浓度为0.02 mg/ml的奥硝唑溶液，在200～400 nm波长范围内进行紫外吸收波长扫描，扫描结果见图1。由图1得出奥硝唑的紫外最大吸收波长是319 nm。

2.2.2干扰试验 配制10 mg/ml PLGA的乙醇溶液，在200～400 nm波长范围内进行紫外吸收波长扫描，扫描结果见图2。由图可看出该溶液在202 nm处有最大吸收，而在319 nm处无吸收，对奥硝唑的检测无干扰。

图1 奥硝唑紫外扫描图谱

图2 空白微球紫外扫描图谱

2.2.3奥硝唑标准曲线的建立 精密称取奥硝唑对照品 10 mg，用纯化水溶解，在50 ml量瓶中定容，依次取100、250、375、500、750和1 000 μl至10 ml量瓶中，加入纯化水定容,浓度分别为2.0、5.0、7.5、10.0、15.0和20.0 μg/ml，在319 nm处测吸收度，以浓度C对吸收度A做图，并进行线性回归。结果见表1。

表1 不同浓度奥硝唑的紫外吸收值

以奥硝唑浓度为横坐标，319 nm处的吸光度为纵坐标可得回归方程为：A=0.042 39C+0.111 93，r=0.999 91(n=6)，在319 nm处，奥硝唑的浓度C在2.0～20.0 μg/ml范围内与吸光度A有良好的线性关系。

2.2.4回收率试验 结果表明，平均回收率为(100.01±0.85)%，相对标准偏差<±5.0%，符合测定要求,见表2。

表2 回收率试验结果

2.3PBS缓冲溶液的配制 精密称取磷酸二氢钾13.6 g，加入0.1 mol/L的氢氧化钠790 ml中，用纯化水稀释至2 000 ml即得，备用。

2.4奥硝唑-PLGA微球、膜剂、棒剂体外释放度的测定[1]采用恒温振荡法作制剂体外释药试验[2]，分别称取3批奥硝唑-PLGA微球、膜剂和棒剂各100 mg，每批包含3个样品，放入27个不同的塑料套管中，分别加入1 ml缓冲盐溶液，用密封胶封口，放入摇床中振荡，温度设为37 ℃，转速为100 r/min, 分别在1、3、7、12、24、2和3 d等不同时间段取出塑料套管，离心，取出上清液，同时立即补加等量的缓冲液(pH 7.4)，样品用紫外分光光度法在319 nm处测定吸光度，按回归方程测定释药量，计算累积释药百分率，以累积释药百分率对时间作图，释放结果见表3。

表3 奥硝唑-PLGA制剂体外释放结果(n=3)

2.5奥硝唑-PLGA微球、膜剂、棒剂释放参数的比较 运用Excel[3]程序 计算奥硝唑-PLGA微球、膜剂、棒剂体外释放参数m、T50、Td的值，结果见表4。

表4 奥硝唑-PLGA微球、膜剂、棒剂释放参数比较

3 讨论

本实验采用紫外分光光度法测定3种奥硝唑-PLGA缓释制剂的释放度，具有操作简便、灵敏度高、适用范围广和方法准确度好等特点。

实验结果表明，3种奥硝唑-PLGA缓释制剂的累积释放百分率均在75%以上，符合国家药品标准。总体上说，吸收速度受释放速度限制的药物，其生物利用度与释放速度有较好的相关性。

本实验根据奥硝唑-PLGA微球、膜剂、棒剂的释放曲线计算出的T50和Td值与实际情况有所偏差，原因可能是释放曲线是平滑的曲线，采用线性方法来计算，相关系数达不到标准，使得计算结果有误差。推测对于释放曲线更接近直线型的制剂则误差较小。

综上所述，该方法线性范围宽，回收率高，溶液稳定性良好，可用于奥硝唑-PLGA制剂的释放度分析。

1 周毅生，秦梅颂，咸银库，等.奥硝唑结肠定位肠溶片质量标准的研究.广东药学院学报，2007,23(6)：603

2 杨秀玲，张志清，董立. 阿昔洛韦白蛋白微球的制备及体外释药.中国药学杂志，2000, 35(10): 676

3 方崇波.运用Excel程序快速计算片剂的溶出度参数.中国药业，2006,15(18):41