PAMAM-D纳米载体介导TFinAODN防治心肌缺血再灌注脂质过氧化损伤的实验研究

李春海 宋 树英 桑 翠玲 李 文慧 尹俊

心肌遭受缺血损伤后恢复血流灌注，反而加重心肌损伤，称之为心肌缺血再灌注损伤。其表现为心肌水肿、氧利用能力下降、心肌收缩功能和细胞-容积调节作用减弱或丧失，心室顺应性下降。常伴有水、钠潴留，线粒体破碎，收缩带坏死，细胞膜断裂等。特别是细胞膜损伤后可致细胞内钙超载，严重的线粒体肌浆网状体内的钙积聚，可导致细胞的最终死亡［1］。心肌缺血再灌注损伤的发生机制与局部的炎性反应和凝血系统的激活有密切关系。研究发现，组织因子(tissue factor，TF)在缺血再灌注损伤的发生过程中起关键作用［2］。因而减少TF的合成与释放是防治缺血再灌注损伤的重要措施。本研究设计合成了针对大鼠TF的反义寡脱氧核苷酸(antisense oligodeoxynucleotide，AODN)，利用聚酰胺-胺型树枝状高聚物 (polyamidoamine dendrimers，PAMAM-D)纳米载体介导 AODN转染至Lewis大鼠体内，观察了AODN对大鼠心肌缺血再灌注过程中脂质过氧化损伤的作用。

1 材料与方法

1.1 大鼠TF寡脱氧核苷酸序列合成 参考 Nakamura等［3，4］的报道，设计大鼠TF寡脱氧核苷酸，由TaKaRa宝生物工程有限公司合成，序列如下:反义寡脱氧核苷酸(antisense oligodeoxynucleotide/TF，AS/TF):5’-CATGGGGATAGCCAT-3’(AODN);正义寡脱氧核苷酸(sense oligodeoxynucleotide/TF，S/TF):5’-ATGGCTATCCCCATG-3’(SODN对照);错配寡脱氧核苷酸(scrambled oligodeoxynucleotide/TF，Sc/TF):5 ’-TGACGCAGAGAGTCGTA-3’(无关ODN对照)。将上述3种寡脱氧核苷酸按电荷比1∶10藕联于G10代PAMAM-D纳米载体［购自Aldrich Chemical公司(Tokyo，Japan)］，构建 ODN-PAMAM-D 的聚合物。

1.2 动物分组 雄性 Lewis大鼠100只，体重230～280 g，随机等分为5组:假手术组(n=20):每只动物经尾静脉注入0.9%氯化钠溶液1 ml。缺血再灌注组(n=20):每只动物经尾静脉注入 PAMAM-D 12 mg/kg(溶于1ml 0.9%氯化钠溶液)。AS/TF防治组(n=20):每只动物经尾静脉注入AS/TFPAMAM-D 16 mg/kg(溶于1ml 0.9%氯化钠溶液，相当于AS/TF 4 mg/kg)。……