豚鼠心肌细胞中Kir2.1对内向整流钾电流组成的贡献

杨慧芳

心肌细胞内向整流钾电流Kir主要参与心肌细胞动作电位的4级静息电位过程，与心肌细胞动作电位时程(APD)和有效不应期(ERP)的长短密切相关，对维持心肌细胞正常生理功能有重要的作用，IK的异常也常常是心律失常的因素之一［1］。IK主要维持心肌细胞的静息膜电位，是动作电位的重要组成部分，是维持心室肌细胞正常功能活动的重要电流。本文研究小鼠心肌细胞内向整流钾电流Kir2.1的在静息膜电位中的参与与在所有内向整流钾电流中所占比例。

1 材料与方法

1.1 实验动物 豚鼠8只，体重200～250 g。本实验中豚鼠由河北医科大学动物实验中心提供。

1.2 试剂与溶液

1.2.1 试剂:Ⅱ型胶原酶(collagenase typeⅡ)为 GIBCO公司生产，其他试剂均为国产分析纯。

1.2.2 溶液:①无钙台氏液:NaCl 137.7 mmol/L，NaOH 2.3 mmol/L，KCl 5.4 mmol/L，MgCl 21 mmol/L，N-(乙羟乙基)哌嗪-N-2乙烷磺酸(HEPES)5 mmol/L，葡萄糖10 mmol/L(用NaOH调 pH 值 至 7.4);②KB 液:KCl 83 mmol/L，K2HPO430 mmol/L，MgSO45 mmol/L，KOH 2 mmol/L，丙 酮 酸 钠5 mmol/L，牛 磺 酸 20 mmol/L，葡 萄 糖 10 mmol/L，EGTA 0.5 mmol/L，HEPES 5 mmol/L，(用 KOH 调 pH 值至 7.2);③记录Kir2.1的电极内液;④记录 Kir的电极外液:NaCl 150 mmol/L，KCl10 mmol/L，CaCl21.8 mmol/L，MgCl25.4 mmol/L，用NaOH调pH值至7.4。

1.3 仪器 膜片钳放大器Axon 200B为美国Axon公司产品;电极拉制器和三位操纵器均为Sutter公司产品;倒置显微镜TE2000-S为Nikon公司产品。

1.4 方法 豚鼠心肌细胞的急性分离:将豚鼠麻醉后快速开胸取出心脏，至于冰无钙台式液中进行主动脉插管，连于Langendorff灌流装置上，进行恒压恒温逆行灌流。灌流液温度37℃，流速7 ml/min，用前用100%O2饱和。先用无钙台氏液灌流5 min，冲洗心脏中残留的血液，然后灌以含12 mg/mlⅡ型胶原酶的无钙台氏液，循环灌流心脏1 520 min，之后再用无钙台氏液灌流，以冲洗心脏中残留的胶原酶。将消化后的心肌剪下，置于KB液中剪碎，轻轻吹打至细胞分散。……