黄芪甲苷对兔脂肪来源的间充质干细胞体外增殖和细胞周期的影响

何文涓，何晓升，袁志坚，张兰芳

(1.无锡卫生高等职业技术学校，江苏 无锡 214028;2.杭州师范大学 临床医学院，浙江 杭州 310036)

黄芪含有黄芪甲苷、多糖、黄酮、单糖、生物碱、叶酸、多种氨基酸等有效成分，具有提高免疫机体免疫功能，抗衰老等作用［1］。我们前文研究了黄芪多糖对兔脂肪来源的间充质干细胞(ASCs)体外增殖的作用［2］。本研究观察了黄芪甲苷对兔脂肪来源的ASCs的周期和体外增殖的作用。

1 材料

黄芪甲苷(含量98%，批号:TCM067-110724)，南京替斯艾么中药研究所;DMEM培养基及胎牛血清，美国Gibo公司;四甲基偶氮唑盐(MTT)和碘化丙啶(PI)，美国Sigma公司;抗体CD14，美国Caltag公司;CD29，美国Chemcon公司;CD44，美国Chemcon公司;CD45，美国Antigenix公司。

流式细胞仪，美国BD公司;3350型自动酶联免疫检测仪，美国Beckman公司;TY6731台式冷冻离心机，美国Beckman公司。

2 方法

2.1 兔脂肪来源的ASCs的培养和表型鉴定

按文献［2］方法进行。

2.2 分组及培养

选取生长良好的第3代传代细胞，用0.25%胰蛋白酶消化，制成细胞悬液，将浓度调至2×109/L，接种于96培养板中。置于培养箱中培养24 h。

随机设置对照组、空白组和实验组。对照组仅加培养液，空白组不加培养液，实验组按设定的实验方案依次加入含有不同浓度黄芪甲苷溶液的培养液。再培养24 h，在倒置显微镜下观察细胞形态，计算细胞数。

2.3 流式细胞仪检测细胞周期

取2.2项下培养24 h后的其中一组细胞液(黄芪甲苷浓度为2.5 mg/L)，收获细胞，将浓度调为5×107/L，在4℃下用磷酸盐缓冲液(PBS)洗涤一次，75%乙醇20℃固定过夜;然后再用PBS洗涤一次，离心，弃上清，加 PC缓冲液100 μL，37℃水浴间断振荡30 min，加10 mg/mL RNAse 10 μL及50 mg/mL PI溶液 490 μL，室温避光 30 min，用流式细胞仪检测细胞周期。……