白芷根中香豆素类成分的组织化学定位研究

兰志琼 ，卢先明 ，陈继兰，周 毅，马逾英，胡友福

1.成都中医药大学药学院，中药材标准化教育部重点实验室，四川 成都 611137；2.成都中医药大学基础医学院，四川 成都 611137

组织化学（histochemistry）是建立在形态学基础之上的边缘科学范畴，是研究细胞和组织中的化学组成、定位与定量以及代谢状态的科学[1]。组织化学的不断发展，为我们开展中药活性成分的产生、分布和积累规律提供了新颖、科学、可靠的方法。

白芷始载于《神农本草经》，为常用的解表、止痛药。现代研究结果表明，香豆素类化合物为白芷的主要有效成分之一。本文利用香豆素类成分的自发荧光性质，首次引入植物冰冻切片、荧光显微技术等组织化学研究方法，确定香豆素类成分在白芷根中的积累部位，为进一步揭示白芷活性成分香豆素类及其积累规律与白芷组织结构及发育的关系奠定一定基础。

1 仪器与试药

冰冻切片机（CM-1900，Leica），电控型倒置荧光显微镜（DMIRE2，Leica），显微摄影系统（DFC300，Laica）。

OCT包埋剂 （北京海德创业生物科技有限公司，批号：4583，118 ml/瓶），欧前胡素（宝鸡辰光生物有限公司，批号：482-44-0。准确称取欧前胡素0.1 mg，用甲醇溶解在10 ml量瓶中，定容即得欧前胡素溶液），无水乙醇、95%乙醇、甲醇、冰醋酸、福尔马林、丙三醇均为分析纯。

白芷根新鲜材料取自成都中医药大学（温江校区）药用植物园的栽培植物，经成都中医药大学马逾英教授鉴定为伞形科植物杭白芷Angelica dahurica（Fisch.ex Hoffm.）Benth.et Hook.f.var.formosana（Boiss.）Shan et Yuan。 2011年 5月分3次取两年生白芷根中部新鲜材料做正式实验。

2 方法与结果

2.1 白芷根冰冻切片的制作

冰冻切片是利用低温使组织迅速冻结达到一定硬度进行切片的一种方法[2]。……