靶向MRP1基因的shRNA稳定逆转肺癌的多药耐药性*

邵淑丽，崔婷婷，贾红双，谢振丽，张伟伟，刘 迁，陈薇薇，李 爽，陈 丽

(齐齐哈尔大学生命科学与农林学院，黑龙江 齐齐哈尔 161006)

化疗是肺癌的主要治疗手段之一，而多药耐药是导致肺癌治疗失败的主要原因［1－2］。多药耐药(multidrug resistance，MDR)是指肿瘤细胞对一种抗肿瘤药物出现耐药的同时，对其它结构不同、作用靶位不同的抗肿瘤药物也产生抗药性的现象［3］。肿瘤多药耐药的机制复杂，其中主要涉及细胞外排药物的调控机制。已知相关的转运体(transporter)属ABC(ATP－binding cassette)转运蛋白超家族，ABC转运蛋白超家族是人类最大的转运蛋白基因家族，编码产物是一组跨膜蛋白，即ABC转运蛋白。其超家族又分为7个亚家族(ABCA、ABCB、ABCC、ABCD、ABCE、ABCF、ABCG)，包括 49 个基因。其中参与肿瘤多药耐药的主要成员有ABCB1编码的P－糖蛋白、ABCC1编码的多药耐药相关蛋白、ABCG2编码的乳腺癌耐药蛋白。与肿瘤多药耐药相关的主要基因有位于第7号染色体的q21.1区的多药耐药蛋白1(multidrug resisitance protein 1，MDR1)基因、位于染色体16q13.1上的多药耐药相关蛋白1(multidrug resistance－associated protein，MRP1)基因，和位于人染色体4q22上的乳腺癌耐药蛋白(breast cancer resistence protein，BCRP)基因。肺癌多药耐药主要由MRP1基因介导，药物通过谷胱甘肽S转移酶和谷胱甘肽(GSH)结合，由 MRP1转运出胞外［4］。MRP1基因表达增高可导致多药耐药的产生，其编码产物为多药耐药相关蛋白，分子量为190 kD，属于跨膜转运蛋白。RNA干扰(RNA interference)作为一种新的特异性封闭目的基因表达的方法，已成功用于肿瘤基因功能和基因治疗的研究。为了稳定、持久地逆转肺癌细胞的多药耐药性，本研究采用MRP1 shRNA表达质粒载体转染A549/DDP肺癌多药耐药细胞，经G418筛选，有限稀释法挑取单克隆得到阳性单克隆细胞，探讨表达MRP1 shRNA阳性单克隆细胞与亲本A549/DDP多药耐药细胞在多药耐药方面的变化。……