氧化应激和P53参与波动高糖诱导的肾小管上皮细胞凋亡*

李素娟，李剑敏，汪 洋，王万铁，邱晓晓，许益笑，金可可△

(温州医学院1病理生理教研室，2附属第一医院病理科，浙江 温州 325035;3中国人民解放军第八二医院内分泌科，江苏 淮安 223001)

糖尿病肾病(diabetic nephropathy，DN)是糖尿病患者常见而严重的慢性并发症，高血糖导致的肾脏细胞凋亡参与糖尿病肾病的发生、进展［1］。近年资料报道，糖尿病慢性并发症的发生和发展不仅与整体血糖控制水平密切相关，也与血糖波动性密切相关。血糖波动性越大，糖尿病慢性并发症的发生率越高，预后越差［2］。我们前期研究也发现，糖尿病大鼠血糖明显波动可加速肾小管上皮细胞凋亡［3］。研究表明，急性血糖波动要比持续的高血糖状态更能促进氧化应激反应的发生［4－5］;P53与细胞凋亡的发生密切相关［6］。因此，本研究旨在观察氧化应激和P53蛋白在波动性高糖诱导的肾小管上皮细胞凋亡中的作用，以探讨波动性高糖比稳定性高糖引起更严重的肾小管上皮细胞凋亡的机制。

材料和方法

1 材料

DMEM培养液、胎牛血清、胰蛋白酶购自Gibco，肾小管上皮HK－2细胞株购于北京协和医科大学细胞中心;P53抑制剂PFT－α、抗氧化剂N－乙酰半胱氨酸(N－acetyl－L－cysteine，NAC)购自碧云天生物技术研究所;链脲佐菌素(streptozocin，STZ)及枸橼酸钠分析纯购于Sigma;普通速效胰岛素(10 mL，400 U)购于江苏万邦生化有限公司;强生(Johnson)稳步倍加血糖仪及试纸购于美国强生;丙二醛(malondialdehyde，MDA)和超氧化物歧化酶(superoxide dismutase，SOD)试剂盒购自南京建成生物工程研究所;TUNEL试剂盒购自Hoffmann－La Roche;非生物素标记的即用型免疫组化Ⅱ抗试剂盒购自……