冠心病患者血浆循环miR－126的表达及其对血管内皮细胞的影响*

郑志伟，劳海燕，余细勇，，陈纪言，林秋雄，麦丽萍，钟诗龙，△

(1南方医科大学药学院，广东 广州 510515;2广东省人民医院医学研究中心，3广东省心血管病研究所，广东 广州 510080)

MicroRNA(miRNA)是一类小分子非编码单链RNA，通过与靶基因互补配对影响翻译水平，在转录后水平对生物体基因的表达起精细的调节作用［1］。它在生物体的生长、发育及疾病的发生发展等过程中起着十分重要的作用。目前人们关注的主要是miRNA在组织细胞内的功能，但是近来研究发现，血浆中也存在大量的循环miRNA，并且不同的生理疾病的状态下血浆中的miRNA表达谱各不相同［2，3］。血浆循环miRNA在肿瘤、糖尿病等多种疾病中呈特异性表达，提示血浆miRNA可作为潜在的生物标记物用于疾病的诊断和治疗。从研究发现循环miRNA在肿瘤、心衰、心肌梗死和糖尿病等疾病中的显著意义以来，人们就一直致力于循环miRNA可否用于临床疾病的无创诊断预警方面的应用研究，随着检测技术方法的不断进步，循环miRNA在疾病诊断中的应用研究成为研究的热点。本研究旨在检测冠心病患者和健康对照血浆中循环miR－126和miR－16的表达，进一步通过抑制miR－126在血管内皮细胞的表达，观察miR－126对血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor，VEGF)的影响。

材料和方法

1 材料

Trizol LS和Trizol试剂购自Invitrogen;氯仿、异戊醇购于广州化学试剂厂;proteinase K、glycogen、Maxima SYBR Green/Fluorescein qPCR Master Mix、TurboFectTMsiRNA transfection reagent购于 Fermentas;hsa－miR－126抑制剂由上海吉玛制药公司合成;茎环引物和上、下游引物由Invitrogen合成;dNTP(10 mmol/L)、RNase free 水、RNA inhibitor、M － MLV逆转录酶购于TaKaRa;DMEM/F12(1∶1)培养基购于赛默飞世尔生物化学制品(北京)有限公司;0.25%胰酶溶液购于吉诺生物医药技术有限公司。……