三氧化二砷对 SPCA/Ⅰ人肺腺癌细胞株抗增殖及诱导凋亡作用的研究

朱慕云,姜正华,葛 辉,李 梅,胡茂志

(1.扬州大学临床医学院呼吸科;2.扬州大学实验中心,江苏扬州,225001)

三氧化二砷(As2O3)是一种有毒的化合物,但低剂量 As2O3除作为一种有效的中药治疗牛皮癣、梅毒和类风湿性关节炎等多种疾病外,近年来的研究表明三氧化二砷具有抗肿瘤作用。本研究探讨了三氧化二砷对 SPCA/Ⅰ人肺腺癌细胞株的生长抑制及诱导肿瘤细胞凋亡的作用,现报道如下。

1 材料与方法

三氧化二砷制剂(伊泰达),由哈尔滨伊达药业提供;二甲基亚砜(DMSO)和四甲基偶氮唑盐(MTT)购于上海华美公司;SPCA/Ⅰ人肺腺癌细胞株、RPMI-1640培养基及胰蛋白酶购于中国科学院上海生物细胞研究所;Annexin V:FITC Apoptosis detection kit及 FACSAria流式细胞仪:均为美国 Beeton Dickinson公司。

细胞培养:将 SPCA/Ⅰ人肺腺癌细胞株培养于 37℃含 5%CO2温箱内,使用 RPMI-1640培养液(含 15%小牛血清,青链霉素各 100 U/mL,L-谷氨酰胺200mg/L)培养,肺癌细胞呈贴壁生长,2～3 d后用 0.25%胰蛋白酶消化传代。

实验分组:实验共设 3组,分别为空白组(加培养基 200μL),对照组(单细胞悬液 100μL+培养基 100μL,实验组(单细胞悬液100μL+处理因素 100μL)。

癌细胞生长抑制率的测定:将消化计数的单细胞悬液加入 96孔培养板中,调节细胞浓度为 1×105个/mL,采用MTT法,每孔加入单细胞悬液100μL,三氧化二砷制剂 100μL,浓度分别为每毫升 0.1 μg、0.4 μg、0.8 μg、1 μg、4 μg及 8μg,置 37℃、5%CO2培养箱中培养 24 h后,每孔加入 40μL MTT液(5 mg/mL),继续培养 4 h后,吸取上清液。每孔加入二甲基亚砜(DMSO)100μL/孔,振荡 10 min,使 MTT还原产物完全溶解,用ClinBio120型酶标仪,测定每孔光密度值(A570)。肿瘤细胞的生长抑制率(%)=(1-实验组 A值/对照组 A值)×100%

细胞凋亡的形态学变化:将消化计数的单细胞悬液加入 96孔培养板中,调节细胞浓度为 1×105个 /mL,每孔加入单细胞悬液 100μL和 1μg浓度的三氧化二砷制剂 100μL。……