免疫法和化学法检测粪隐血的方法评价

梁 巍 潘 莉 王域平

（信阳市中心医院检验科，河南 信阳 464000）

大便隐血试验是临床诊断消化道出血和普查筛选消化道肿瘤的重要检测项目,常用的化学法是，如联苯胺法、邻甲苯胺法、无色孔雀绿法、愈创木、匹拉米洞等，以邻甲苯胺法较为实用。免疫学方法是胶体金标记夹心免疫法。化学方法和免疫方法，在临床应用中我们发现各有其优势，为比较了二者的灵敏性，特异性和抗干扰性，并对260例疑有消化道出血的患者进行了观察分析，并将获得的结果进行分析研究。

1 材料与方法

1.1 标本来源

收集本院患者新鲜粪标本260份。

1.2 试剂

便隐血胶体金检测试纸，北京万华普曼生物工程有限公司提供；3%H2O2自配，邻联甲苯胺由上海远航试剂厂生产，冰乙酸及无水乙醇由广州东红化工厂生产，均为AR级。称取邻联甲苯胺1g溶于冰乙酸及无水乙醇各50mL中，棕色瓶保存（4℃保存8～12周）[1]。

1.3 方法

每份标本均做邻联甲苯胺法和便隐血胶体金试纸检测，邻联甲苯胺法按《全国临床检验操作规程》[2]进行结果判定；便隐血胶体金试纸法按说明书操作并进行结果判定。准备试管和BASO专用滤纸。并在试管中加入0.5mL的蒸馏水。先用竹签从粪盒内取少量粪便，大约火柴头大小，并放入试管中与蒸馏水充分混合均匀；将免疫试纸条按箭头所指的一端浸入混合液中，在5min内观察结果，并记录结果；同时在同一位置另取少量粪便涂于滤纸上，用邻联甲苯胺法操作并在5min内观察记录结果。

1.4 统计学处理

计数资料采用χ2检验，P＜0.05表示差异，有统计学意义。

2 结 果

260例新鲜粪标本用免疫法与化学法检测，阳、阴性对照见表1。

结果显示，免疫胶体金法和化学法检测粪便隐血结果差异，据有统计学意义。

表1 阳、阴性对照表

3 讨 论

粪便隐血是指消化道每日出血量＜5mL，肉眼观察粪便颜色无明显改变，粪便涂片镜检观察不到完整红细胞，需要采用其他方法才能证实消化道有出血。本实验所采用的粪便标本外观均为黄色，外观通常无明显异常。邻联甲苯胺法利用血红蛋白中的亚铁血红素具过氧化物酶活性，催化过氧化氢放出新生态氧，把受体邻联甲苯胺氧化成联甲偶氮苯而显蓝绿色。任何有类似氧化物酶活性的物质都可影响此实验，如动物的血红蛋白，另外维生素C、铁剂、绿色蔬菜均会造成假阴性[3]。免疫胶体金法是利用人血红蛋白的单克隆抗体原理制成的免疫试纸条，具有灵敏度高（血红蛋白为0.2µg/mL）和特异性强的特点。免疫胶体金法为WHO和世界胃肠镜检查协会推荐做粪便隐血试验确认的方法[4]，且对操作者无损害，但其成本较化学法高。化学法的阳性率低于免疫法，易受食物或药物的干扰，故极少量的出血会造成邻联甲苯胺法（阴性）胶体金法（阳性）的结果。但如果血红蛋白在消化道停留时间过长，或受细菌分解等因素而降解，其与胶体金试纸上包被的抗体与相应抗原受到破坏时就会出现假阴性；另外当出血量大于胶体金法检测范围，随着血红蛋白含量增加，抗原抗体复合物反而减少，产生后带现象，出现假阴性的现象。化学法灵敏度和特异性虽不及免疫胶体金法，但可根据所显示蓝色的深浅对出血量做出半定量，其实用价值是不能被免疫胶体金法所取代[5]。当免疫胶体金法显示阳性时，再用化学法来验证，以减少免疫胶体金法阳性率过高的问题；免疫胶体金法显示阴性时，还应根据患者消化道出血量大等因素，用化学法来消除因后带现象造成的假阴性。两种方法各有优缺点，笔者认为有条件的实验室应同时开展这两种方法：当二者皆为阳性时，判断为真阳性；化学法阳性而免疫胶体金法阴性者，若外观无改变者建议禁肉食、大量绿色蔬菜、某些已知有影响的药物2～3d后复查；若外观有所改变者应稀释粪便标本，重测免疫胶体金法；若化学法阴性而免疫胶体金法阳性者，建议患者多次连续复查及做进一步检查，为临床提供客观、准确的检测结果。

[1]叶应妩.全国临床检验操作规程[M].2版.南京:东南大学出版社,1997:142-143.

[2]熊立凡.临床检验基础[M].3版.北京:人民卫生出版社,2005:243-246.

[3]王建洲,陆希明.三种便潜血试验测定方法的比较[J].哈尔滨医药,2005,25(2):1314.

[4]Young GP,St John DJ,Winawer SJ,et al.Choise Of fecal occult blood tests for colorectal cancer csreening:recommendations based on performance characteristics in population studies:a WHO World Health Organization)and OMED(World Organization for Digestive Endoscopy)report[J].Am J Gastroenterol,2002,97(10):2499-2507.

[5]左祥,刘和平,张彦华.检测大便隐血中的钩状效应及对策[J].检验医学与临床,2007,4(6):551-552.