手足口病危重型患儿淋巴细胞亚群及免疫球蛋白检测

莫 扬

莫 扬

湖北省襄阳市中心医院检验科，襄阳441021

本文2011－09－19收到，2011－10－25修回，2011－10－28接受

手足口病是由肠道病毒引起的急性传染病，以柯萨奇病毒A组16（Cox A16）型和肠道病毒71（EV71）型多见，多发生于学龄前儿童，尤以3岁以下发病率最高，为小儿常见的传染病，患者和隐性感染者为传染源，主要通过消化道、呼吸道和密切接触等途径传播。病毒进入人体后在肠壁细胞中增殖，增殖后可侵入血流，形成病毒血症，在易被压迫的部位如手、足血流中游离出来，再在这些部位的细胞中增殖并引起病变［1］。本文对60例手足口病危重型患儿进行外周血淋巴细胞亚群及免疫球蛋白检测，以探讨手足口病患儿免疫功能变化，为临床治疗提供实验室依据。

1 资料与方法

1.1 临床资料

按照卫生部医政司发布的《手足口病诊疗指南（2010年版）》［2］确诊为手足口病并符合入住ICU 指征的危重型患儿60例，其中男37例，女23例，年龄0.20～10.00岁，平均2.00岁。正常对照组30例为健康儿童，其中男17例，女13例，年龄0.50～8.00岁，平均2.50岁。

1.2 试剂和仪器

淋巴细胞亚群检测单克隆抗体CD8－FITC、CD56－FITC、CD4－APC、CD19－APC、CD3Per CP、溶血素及流式细胞仪（型号FACSCalibur）均为美国BD公司产品。免疫球蛋白Ig G、Ig A、Ig M 检测试剂由德国SIEMENS公司提供，特定蛋白仪型号为BN Prospec。

1.3 淋巴细胞亚群测定方法

采集患儿入院治疗前及健康儿童空腹静脉血2 ml，以EDTA－K2抗凝。测试分两管进行，每管取细胞数1×106／ml，采用三色直接标记，分别加入CD8－FITC／CD3Per CP／CD4－APC 、CD56－FITC／CD3Per CP／CD19－APC 各 20μl，室温暗处孵育15 min，加入溶血素溶血10 min，1 500r／min离心5 min，加PBS洗涤后上机分析，每测定管获取10 000个细胞。测定结果采用Cellquestpro软件分析：首先以FSC／SSC设门圈定淋巴细胞，然后分别以CD3－FITC／CD8－PE、CD3－FITC／CD4－APC、CD3－FITC／CD56－PE、CD3－FITC／CD19－APC的二维散点图确定CD抗原结合相应抗体的表达率。……