体外抗体功能修饰抑制性KIR对人NK细胞的影响

吴功强，赵妍敏，黄 河，来晓瑜

(1.浙江大学医学院附属第一医院骨髓移植中心、血液研究所，浙江杭州310003;2.义乌市中心医院血液科，浙江义乌322000)

异基因造血干细胞移植(allo-HSCT)是目前恶性血液病治愈的唯一有效途径，但存在移植后移植物抗宿主病(GVHD)、复发和免疫重建等移植相关问题，尤其是如何在防止GVHD的同时诱导足够强的移植物抗白血病(GVL)作用，是目前临床移植工作者最大的难题。许多的动物实验和临床观察均提示allo-HSCT后，由于KIR-配体不相合导致供者NK细胞活化，活化的NK细胞具有促进移植物的植入、阻止T细胞介导的GVHD、攻击宿主白血病细胞发挥GVL效应。因此，如何人工改造或修饰KIR活性，使供者的KIR抑制性受体抑制而激活NK细胞，对改善移植疗效具有重要的意义。本研究在建立人NK细胞的体外培养体系的基础上，研究单克隆抗体封闭抑制性受体KIR2DL1和KIR2DL2/KIR2DL3后对人NK细胞功能的影响。

1 材料和方法

1.1 细胞株 人慢性粒细胞白血病细胞株K-562细胞和急性早幼粒白血病细胞株NB4细胞均为本实验室所提供，人Burkitt淋巴瘤Raji细胞株由浙江大学医学院附属第一医院血液病研究所提供。

1.2 试剂 RPMI 1640培养基和胎牛血清购于GIBCO公司，重组人白介素-2(rhIL-2)及rhIL-15购于Biolegend公司，非放射性细胞毒测定试剂盒购于Promega公司，T淋巴细胞尼龙毛柱为浙江大学免疫所赠送，丝裂霉素购于Sigma公司，TGF-β1因子ELISA检测试剂盒购自上海朗顿公司，rhGM-CSF、rhIL-4及 LPS均为浙江大学医学院附属第一心血管病研究所赠送，KIR2DL1的封闭抗体抗 CD158a单抗及KIR2DL2/KIR2DL3抗体为抗 CD158b单抗购于BD公司……