细胞因子诱导K562/MDR1分化为具有多药耐药特征的树突状细胞的实验研究

盛立霞，谢晓宝，欧阳桂芳，王 怡，朱慧玲，黄 河

(1.浙江大学医学院附属第一医院骨髓移植中心，浙江杭州310003;2.宁波市第一医院血液科，浙江宁波315010;3.苏州大学附属第三医院血液科，江苏常州213003)

多药耐药基因1(multidrug resistance gene1，MDR1)及其编码的膜表面P-糖蛋白(P-glycoprotein，P-gp)高表达是介导白血病细胞对常规化疗耐药的重要机制之一，传统化疗后残留的耐药细胞往往是白血病复发的根源。在动物实验及初步临床结果中，基于树突状细胞(dendritic cell，DC)的免疫治疗能清除微小残留病灶，为预防白血病复发提供了新的治疗策略。在我们的前期工作中已经证实，耐药细胞所表达的Pgp能够作为免疫识别的靶抗原，通过负载DC诱导Pgp特异性的免疫应答，从而杀伤残留的耐药白血病细胞。转染MDR1基因无疑是一种有效负载Pgp抗原的方案，但是，将MDR1基因转染DC前体细胞是否影响DC的诱导分化效率，高表达Pgp是否影响DC的抗原递呈功能，分化的DC能否获得多药耐药特征?这些问题都迫切需要进一步的研究。为此，本研究采用细胞因子组合，分别诱导转染MDR1基因的耐药K562细胞株及亲本K562细胞株分化为树突状细胞，探讨MDR1基因转染DC前体细胞对诱导分化后DC的表型及功能的影响。

1 材料与方法

1.1 主要实验材料 RPMI 1640、胎牛血清(FBS)为 GIBCO 公司生产;rhGM-CSF、rhIL-4、rhTNF-α购自Peprotech公司;MTT为Sigma公司产品;FITC或PE标记鼠抗人 CD1α、CD83、CD80、CD86、HLA-ABC、HLA-DR 和 Pgp 等单抗及同型对照购自 BD公司，流式细胞仪为FACScabilur型，BD公司生产。

1.2 细胞株与培养条件 K562和K562/MDR1细胞株由江苏省血液病研究所陈子兴教授惠赠。其中，K562/MDR1细胞是由逆转录病毒转导法将外源MDR1基因转入K562细胞，并经过长春新碱(VCR)筛选获得的多药耐药细胞株，传20代后仍稳定高表达Pgp糖蛋白，具有经典MDR1表型及多药耐药特征。……