訾占超,夏应菊,韩 雪,汪葆玥,遇秀玲,翟新验,田克恭,倪建强
(中国动物疫病预防控制中心,北京100193)
输血传播病毒(Torque teno virus,TTV)是于1997年从日本肝炎患者血清中首次分离鉴定的一种新病毒[1]。TTV为无囊膜的单股环状负链DNA病毒,目前归类于圆环病毒科指环病毒属[2]。TTV具有种属专一性,不同物种间其核酸同源性较低[3]。TTV可通过输血、血液制品、性行为、粪口途径等方式传播,血液、唾液、粪便、乳汁、胆汁均可带毒。对不同人群TTV的流行病学调查结果显示,一般人群的阳性率多在10%以上,呈无症状携带[4]。除感染人外,TTV还广泛存在于各种动物体内[5]。猪TTV呈全球性分布流行。猪感染TTV后,一般不表现临床症状,但有研究表明,TTV在断奶后仔猪多系统综合征(PMWS)和猪皮炎肾病综合征(PDNS)中可能会协同其他病毒致病[6]。近几年,TTV因其普遍存在和广泛的宿主范围等特点而备受关注。
本研究通过分析分布于中国大陆29个省的猪血清样品,比较全面地反映了当前我国猪群中TTV的流行状况及其与地区性分布和样品来源的关系。
1.1 临床样品来源 2009年11月采自中国大陆的1990份生猪血清样品。采样范围为除内蒙古自治区和青海省外的29个省市自治区29个县内的32个规模场、48个行政村、23个屠宰场。
1.2 主要试剂 TaqDNA聚合酶等购自TaKaRa公司,Trans2K Plus DNA Marker购自全式金公司,核酸提取试剂盒购自TanBead公司。
1.3 DNA模板制备 采用KingFisher公司96孔核酸提取仪进行核酸提取,具体方法参见仪器说明书。
1.4 引物设计 分别针对TTV的两个型设计两对引物。TTV1上游引物5'-CTCGCTTCGCTCGCACCA CG-3', 下 游 引 物 5'-GCATAAACTCAGCCATTCG G-3',扩增TTV1片段长度约293 bp。……