规模化猪场大肠杆菌β-内酰胺类药物耐药性检测及其超广谱β-内酰胺酶调查

田国宝，王红宁，张安云，张 毅，杨 鑫，徐昌文

(四川大学生命科学学院/动物疫病防控与食品安全四川省重点实验室/生物资源与生态环境教育部重点实验室/“985工程”西南资源环境与灾害防治科技创新平台，四川成都610064)

大肠杆菌(Escherichia coli)是引起动物腹泻的主要病原之一，也是引起仔猪、雏禽死亡的重要原因。随着抗菌药物的广泛应用，E.coli耐药问题也越来越严重。β-内酰胺类药物是临床常用的抗生素，占抗生素使用总量约30%～40%[1-2]。E.coli对广谱β-内酰胺类药物耐药最主要的耐药机制是产β-内酰胺酶(β-Lactamases)[3]，而其中以超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)受到最为广泛的关注。

近年来，随着全世界对细菌耐药问题的广泛关注，动物源细菌产β-内酰胺酶及ESBLs研究逐渐增多[4]。而我国动物源细菌对β-内酰胺类药物的耐药性研究很少。本研究对全国19个省97个猪场602株E.coli进行了β-内酰胺类药物耐药谱系检测、耐药基因型分析和分子流行病学调查，为阐明我国猪源E.coli对该类药物的耐药现状和耐药机制，为耐药性控制和药物合理使用提供实验依据。

1 材料和方法

1.1 菌株 2006年2月～2008年12月从19个省97个规模化猪场分离602株E.coli分离株。菌株鉴定结合了菌落形态特征、染色镜检、生化鉴定、16S rDNA序列分析和VITEK 32微生物自动鉴定系统等方法。药敏质控菌ATCC25922(敏感株)、ATCC35218(产β-内酰胺酶株)购自杭州微生物有限责任公司。试验菌株由四川大学动物疾病防控生物工程研究中心保存。样品采样分布见表1。

1.2 主要试剂和设备 抗菌药物及药敏纸片购自英国 Oxoid公司 (Oxoid，Basingstoke，UK)，Taq酶、100 bp DNA ladder、Maker DL-2000和DNA凝胶回收试剂盒购于天根生化科技有限公司，dNTP、培养基和常规化学试剂购自宝生物工程(大连)有限公司，PCR引物由上海生工有限公司合成。……