1型糖尿病大鼠认知功能和细胞色素C蛋白表达改变实验研究

阮丽丽 杭州市红十字会医院神经内科 杭州 310003

糖尿病性脑病变是糖尿病常见的慢性并发症之一，主要表现为认知功能障碍、认知力减弱、智力降低、情感障碍等。本实验应用链脲佐菌素（STZ）制备1型糖尿病模型大鼠，观察糖尿病大鼠的认知功能，以及大鼠海马组织细胞色素C（Cyt-c）蛋白表达的改变，探讨糖尿病对认知功能的影响及其机制，现报道如下。

1 实验材料

1.1 动 物 SD雄性大鼠20只，体质量140～180g，SPF级，由浙江大学医学院动物实验中心提供（SCXK[浙]2003—0001）。

1.2 主要仪器 One-Touch-Ⅱ型快速血糖仪及血糖试纸（美国强生公司）；Morris水迷宫及分析软件（浙江大学药学院药物研究所）；WFZ800-3型紫外可见单光束分光光度计（北京瑞利光学仪器厂）；分析天平（瑞士梅特勒-托利多公司产品）；电泳仪（BIORAD，Power PAC200）；电泳湿转仪（BIO-RAD，Trans-Blot SD）。

1.3 主要试剂 链脲佐菌素（STZ）、Cyt-c及GAPDH抗体（Santa Cruz公司）；山羊抗兔IgG（北京中杉金桥生物试剂公司）；Western blotting相关试剂（碧云天生物技术研究所）。

2 实验方法

2.1 模型建立 20只大鼠用随机数字表随机分为正常组、实验组各10只。两组大鼠均予标准鼠食饲养，并给饮5%葡萄糖溶液。实验组大鼠禁食24h，按60mg/kg腹腔注射链脲霉素（pH 4.4柠檬酸缓冲液配制，置于冰浴备用）。第4天尾部采血以One-Touch-Ⅱ型快速血糖测定仪测每只大鼠空腹血糖，血糖＞15mmol/L大鼠为造模成功。30天后，进行Morris水迷宫测定，处死后取大脑海马组织进行细胞色素C蛋白测定。

2.2 Morris水迷宫测定方法 主要由圆形水池和自动摄象及电脑分析系统组成。水池上方的摄像机同步记录大鼠的运动轨迹。测试前将水注入池中，水深30cm（即水面高出站台表面1cm，使大鼠不能见到站台），放入碳素墨水使之成为黑色，水温22～25℃。……