经熊去氧胆酸治疗妊娠期肝内胆汁淤积症孕妇血清胆汁酸谱分析Δ

凌玲，刘兆明，邵勇#，王富兰(1.重庆市红十字会医院，重庆市40000；.重庆医科大学附属第一医院，重庆市400016)

妊娠期肝内胆汁淤积症(Intrahepatic cholestasis of pregnancy，ICP)是妊娠期特有的并发症。ICP对胎儿影响较大，可发生胎儿窘迫和妊娠晚期不可预测的胎儿突然死亡。目前治疗ICP的主要药物是熊去氧胆酸(Ursodeoxycholic acid，UDCA)和腺苷蛋氨酸(S-adenosy-L-methione，SAMe)。国外大多推荐UDCA作为治疗的一线药物[1]。ICP最显著的生化异常是血清中胆汁酸水平升高。人体内代谢的胆汁酸主要为5类游离型胆汁酸，即胆酸(Cholic acid，CA)、鹅去氧胆酸(Chenodeoxycholic acid，CDCA)、去氧胆酸(Deoxycholic acid，DCA)、石胆酸(Lithocholic acid，LCA)和UDCA以及它们的甘氨(Glyco-，G)和牛磺(Tauro-，T)结合型胆汁酸[2]。ICP孕妇妊娠中晚期血清总胆汁酸明显升高，其中以甘氨胆酸(GCA)和牛磺胆酸(TCA)为主的结合型胆汁酸升高最为显著，游离型胆汁酸变化不大[3，4]。本研究采用高效液相色谱串联质谱(High performance liquid chromatography-tendem mass spectrometry，HPLC-MS/MS)法检测UDCA治疗ICP孕妇的血清胆汁酸谱的变化，为临床的决策提供依据。

1 材料

1.1 仪器

API2000 HPLC-MS/MS仪，配备Perkin Elmer200泵和tubro离子源(加拿大Applied Biosystems公司)；Miliolpore真空泵和Waters part No WaT086344型吹氮装置(美国Waters公司)；DL-1型固相萃取器(国家色谱研究分析中心)；LD5-2A离心机(北京医用离心机厂)；SZ-93自动双重纯水蒸馏器(上海亚荣生化仪器厂)；Libroafl-200天平(日本Shimadzu公司)；SB-3200超声波清洗器(宁波新芝科器研究所)；Modular 800全自动生化分析仪(瑞士罗氏公司)。

1.2 试药

CA标准品(批号:81-25-4，纯度≥98%)、CDCA标准品(批号:83-44-3，纯度≥99%)、牛磺石胆酸(TLCA)标准品(批号:345909-26-4，纯度≥95%)、LCA标准品(批号:434-13-9，纯度≥97%)、UDCA标准品(批号:128-13-2，纯度≥99%)、GCA标准品(批号:1192657-83-2，纯度≥97%)、TCA标准品(批号:345908-23-1，纯度≥95%)均购自美国Sigma-aldrich公司；甲醇、甲酸、乙腈、醋酸铵均为色谱纯。

2 方法

2.1 色谱及质谱条件[5]

色谱柱:菲罗门pH1-12柱(100 mm×2 mm，3 μm)；预柱:Luna C18(10 mm×2.0 mm，3 μm)；流动相:1/200乙酸水溶液(用氨水调节pH值至4.5)∶甲醇＝30∶70；……