4-HPR体外诱导A549细胞凋亡与Bax/Bak蛋白相关性研究

张 玲，桂淑玉，左 莉，何 苇，周 青，汪 渊

(1.皖南医学院 生物化学教研室，安徽 芜湖 241002;2.安徽医科大学第一附属医院 呼吸内科，安徽 合肥 230022;3.安徽医科大学 分子生物学实验室，安徽 合肥 230022)

肺癌居全球癌症病死率之首，目前化学药物应用在其治疗过程中仍起到重要作用。N-(4-羟基苯基)维生素甲酰胺(4-HPR)是反式维甲酸(ATRA)的衍生物之一，它将ATRA羧基端以一个酰胺基所连接的4-羟苯基取代，是一种活性很高的凋亡诱导因子［1］。本研究观察了4-HPR对人肺腺癌细胞株A549体外生长抑制作用和诱导凋亡情况，并对其机制进行初步探讨。

1 材料与方法

1.1 试剂 ATRA和4-HPR购于Sigma公司，用二甲基亚砜(DMSO)溶解各配制成10 mmol/L的储备液，-20℃避光保存，使用前用细胞培养液稀释到所需浓度。细胞凋亡-Hoechst染色试剂盒购于Beyotime公司。

1.2 实验分组、细胞培养和倒置显微镜观察 实验分6个组，即细胞对照组、溶剂对照组(1‰的DMSO)、1 μmol/L ATRA 组、5 μmol/L ATRA 组、1 μmol/L 4-HPR 组、5 μmol/L 4-HPR 组。将肺腺癌细胞A549培养于含10%小牛血清(购于杭州四季青生物公司)的DMEM(GIBICO公司)培养基中，置37℃、饱和湿度、5%CO2培养箱中。待细胞呈对数期生长时加药处理，3 d后倒置显微镜下观察6个处理组细胞生长情况及形态变化，并拍照记录。肺腺癌细胞株购于ATCC，由安徽医科大学分子生物学实验室保存。

1.3 Hoechst 33258凋亡染色 取普通洁净无菌处理盖玻片置于24孔板内，按4×104/孔种入细胞，次日更换培养基，按1.2中实验分组培养，每组4个实验复孔。待细胞长至约50%～60%时进行染色。吸尽培养液，固定20 min;PBS洗涤;加入Hoechst 33258染色液染色5 min;PBS洗涤;滴抗荧光淬灭封片液于载玻片上，盖上贴有细胞的盖玻片，使细胞生长面接触封片液。……