7种中药成分对新城疫病毒感染鸡胚成纤维细胞能力的影响

邢玉娟,陈玉库,胡元亮,王德云,郭振环,蔡丙严

(1.江苏畜牧兽医职业技术学院,江苏 泰州 225300;2.南京农业大学中兽医学研究室,江苏 南京 210095)

为了研究抗病毒的新型中药成分复方制剂,首先要筛选主药。本试验以新城疫病毒(NDV)为研究对象,在测定氧化苦参碱(oxymatrine,OM)、甘草酸(glycyrrhizic acid,GA)、绿原酸(chlorogenic acid,CA)、栀子苷(geniposide,GP)、虎杖苷(polydatin,PD)、木犀草素(luteolin,LT)、黄芪多糖(astragalus polysaccharide,APS)等7种中药成分对鸡胚成纤维细胞(chickembryo fibroblast,CEF)生长均呈现促进作用的基础上[1],选取安全浓度范围内的高、中、低3种浓度,分别与NDV以3种方式加入到培养24 h已长成单层的CEF中,测定它们对NDV感染细胞能力的影响,为研制抗NDV的中药成分复方提供理论依据。

1 材料与方法

1.1 中药成分 GA、CA、LT购自南京青泽医药科技开发有限公司,含量分别为98.03%、98.4%、98.03%;GP、PD购自中国生物制品检定所,含量均为99.0%;OM购自西安富捷生物技术发展公司,含量为98.8%;APS购自南通四海植物精华有限公司,含量为91.9%。根据药物对CEF安全浓度测定结果,将OM 、GA 、CA 、LT、GP、PD 和 APS分别用细胞维持液稀释成以下浓度(μg/m L):PD为500、250、125;GA 为 250、125、62.5;APS 和 CA 为125、62.5、31.25;OM 和 GP 为 32、16、8;LT 为1.6、0.8、0.4,常规消毒后备用。

1.2 病毒 新城疫病毒(NDV)F48 E8株,由中国农业科学院上海兽医研究所惠赠。将病毒按常规方法接种9日龄SPF鸡胚(购自中牧股份南京药械厂),恒温培养72 h,收获尿囊液,按Reed-Muench法[2]测定CEF半数组织培养感染剂量(TCID50),用细胞维持液配成100 TCID50浓度备用。

1.3 主要试剂和仪器 MEM细胞培养液,Gibco公司产品,按说明书配制,再加入犊牛血清,达5%为细胞生长液、2%为细胞维持液,再按常规量加入谷胺酞氨和双抗;胰蛋白酶,进口分装,用PBS(pH值7.4)配制成0.25%溶液,0.22μm混合纤维素酯微孔滤膜过滤除菌,分装后-20℃保存备用;M TT(四唑溴盐)溶液,Sigma公司产品,按说明书配制,使终浓度为 5 mg/m L,0.22μm微孔滤膜过滤除菌,分装后4℃冰箱保存,1周内用完。……