星形胶质细胞在完全弗氏佐剂诱导的炎性痛中的作用

张涛 陈磊 张怡靓 李楚彦 陈仁义

星形胶质细胞活化会释放某些炎症因子及细胞因子与神经元相应受体结合，增强神经元兴奋性[1]，从而在神经病理性痛中发挥重要作用[2]。炎性痛与神经病理性痛具有不同的发病机制[3]，因此本实验以完全弗氏佐剂(complete Freund's adjuvant，CFA)诱导炎性痛动物模型，观察脊髓背角星形胶质细胞在CFA致痛模型中的作用。

1 资料与方法

1.1 一般资料220～250 g雄性SD大鼠由第四军医大学实验动物中心提供。

1.2 主要仪器和试剂机械痛敏测试仪(North Coast公司);热痛敏测试仪(西安博邦化工有限公司);Real-time PCR反应体系及水平电泳槽(Bio-Rad公司);胶原纤维酸性蛋白(glial fibrillary acidic protein，GFAP)PCR引物(正义链:5'-AGAGGGACTTCCATCCACTG-3'反义链:5'-GGTTGTGGACTCTTCCAGGT-3'南京金斯瑞生物科技有限公司);CFA，L-α-aminoadipate(LAA)及Real-time PCR试剂盒(Sigma公司)。

1.3 实验分组及给药SD大鼠随机分为3组(n=6/组):CFA组(以60 mg/kg剂量腹腔注射4%戊巴比妥钠麻醉大鼠，俯卧位固定于手术台上，于左下肢足底注射100 μl CFA诱导炎性痛模型，同时参照文献[3]行鞘内置管术，术后6 d鞘内给予生理盐水10 μl);LAA组(处理方式同CFA组，但鞘内给予LAA溶液10 μl);对照组(处理方式同CFA组，但足底及鞘内均给予生理盐水)。LAA药物配置:以生理盐水配制，浓度为100 nmol/10 μl。

1.4 疼痛阈值的检测参照文献所述方法[2]，于术前2 d及术后7 d运用von Frey丝检测大鼠左后肢足底机械性痛域，运用Hargreaves热辐射法检测大鼠左后肢足底热痛阈。

1.5 Real-time PCR检测大鼠脊髓背角GFAP mRNA变化行为学测试之后，腹腔注射4%戊巴比妥钠溶液麻醉大鼠(60 mg/kg)，剥离脊髓腰膨大，分离腹背侧，参照文献[4]反转录脊髓背角GFAP mRNA，利用公式2-deltadeltaCt分析数据结果。

1.6 统计学方法数值以均数±标准差表示，利用SPSS 17.0软件行单因素方差分析LSD检验，P＜0.05表示差异具有统计学意义。……