小鼠睾丸组织中转录因子Elk1 cDNA的克隆

廖梅坚 余裕强 朱良杰 孙家振 朱波 张学明

·实验研究·

小鼠睾丸组织中转录因子Elk1 cDNA的克隆

廖梅坚 余裕强 朱良杰 孙家振 朱波 张学明

为了确定Ets家族转录因子Elk1在睾丸组织中有无表达，提取了正常小鼠睾丸组织的总RNA，经RT-PCR、序列测定证实Elk1在正常小鼠睾丸组织中有表达，为进一步探讨其与睾丸发育及精子发生的关系奠定了基础。

Elk1转录因子;睾丸;小鼠

精原干细胞(spermatogonial stem cells，SSCs)微环境的转录调控需Ets相关分子(Ets related molecule，ERM)参与［1，2］。ERM是Ets转录因子家族的成员之一，该家族至少包括11个亚家族、26个因子，广泛参与多种细胞的发育、分化、生长、转化等过程［3］。目前还不知道该家族其他分子在睾丸组织中是否表达。本研究旨在通过RT-PCR获得该家族转录因子Elk1基因的部分编码区，并对其序列进行分析，以确定其在正常睾丸组织中有无表达，为进一步探讨其与睾丸发育及精子发生的关系奠定基础。

1 材料与方法

1.1 实验动物及主要试剂、材料 7～8周龄、体重30～35 g的成年雄性昆明白小鼠4只，颈椎脱臼法处死后取睾丸放入液氮，后移入-70°C冰箱保存。大肠杆菌DH5α株为本室保存，克隆载体pMD18-T、Ex Taq DNA聚合酶、dNTP、反转录酶、RNase、Olig-dT、RNase抑制剂均购自于Takara。DL2000、质粒提取试剂盒、DNA片段凝胶回收试剂盒均购自于北京Tiangen。Trizol试剂购自Invitrogen，焦磷酸二乙酯(DEPC)、琼脂糖均购自Sigma，其他常用试剂购自于长春宝泰克。

1.2 引物设计［4，5］根据GenBank发表的Elk1的全序列设计合成特异性引物。Elk1的上、下游引物分别为:5'-CCTGAACTCTCCAGTTAGCC-3'，5'-CG TCTCCTACTTCAATGGTG-3'扩增片段大小为191bp。

1.3 睾丸组织总RNA的提取及RT-PCR［4，5］参照试剂盒说明，采用Trizol一步法提取睾丸组织总RNA，电泳检测其完整性。……