猪传染性胃肠炎病毒与猪呼吸道冠状病毒荧光RT-PCR鉴别检测方法建立与应用

王慧珊 ，高志强 ，王金宝 ，张鹤晓 ，乔彩霞 ，吴亚琼 ，邢佑尚 ，朱淑芬

（1. 青岛农业大学动物科技学院，山东 青岛，266109；2. 北京出入境检验检疫局，北京 通州，101113；3. 山东省农业科学院，山东 济南，250100；4. 山东农业大学，山东 泰安，271018）

猪传染性胃肠炎（TGE）是由猪传染性胃肠炎病毒（TGEV）引起的一种高度接触传染性肠道疾病，临床上以病猪呕吐、严重腹泻和失水为主要特征，不同品种、年龄的猪只都可感染发病，尤以两周龄以内仔猪、断奶仔猪易感性最强，致死率高，可达100%[1]。该病是一种世界性疾病，给畜牧业生产带来巨大的经济损失，早发现、早确诊对该病的防治意义重大。要做到早确诊就需要快速、敏感、特异的诊断方法。

目前，检测TGEV的常规方法主要有病毒分离鉴定、病毒中和试验、免疫荧光抗体试验、电镜观察、免疫电镜观察、ELISA方法[2]、核酸探针杂交技术[3]、普通RT-PCR技术[4]、多重RT-PCR技术等。这些方法在过去对猪传染性胃肠炎的防制和诊断上起到了重要的作用，但是这些技术要么操作繁琐，周期长，要么灵敏性差，只能进行定性检测而不能定量分析。实时荧光定量RT-PCR技术具有高敏感性、高特异性、高精确定量和方便快捷等优点，非常适用于病毒感染的检测，尤其是感染早期检测。为此我们建立了针对TGEV的TaqMan荧光定量RT-PCR检测方法，为TGEV感染的早期诊断及流行病学调查提供了一种简便、快速、高效、敏感、特异的方法。

猪呼吸道冠状病毒（PRCV）和TGEV在结构上非常相似，同源性达96%以上，被认为是TGEV的自然突变株[5]。在基因结构上，相比TGEV，PRCV只是S基因缺失了B、C两个抗原位点，只针对保守基因N基因建立检测方法可能会对PRCV造成错检。……