结核分枝杆菌链霉素耐药临床分离株rpsL基因突变特征分析＊

魏淑贞，赵秀芹，刘志广，万康林

2.福建省疾病预防控制中心，福州 350001

结核病是结核分枝杆菌（Mycobacteriumtuberculosis，MTB）引起的慢性消耗性传染病。目前，结核病疫情日益恶化，耐药及耐多药现象十分严重。其中链霉素（streptomycin，SM）耐药比例居高不下。第4次全国结核病流行病学调查获悉我国结核分枝杆菌SM耐药率为17.3%，仅次于异烟肼（isoniazid，INH）耐药［1］，引起有关人士的高度关注。SM是最早用于治疗结核病的一线药物，由于结核分枝杆菌生长缓慢，运用传统的方法从分离，鉴定到获得药物敏感性结果往往需要6～8 w。因此，结核分枝杆菌SM耐药的快速诊断方法尤为重要，日益受到国内外学者的关注。为了解我国结核分枝杆菌SM耐药的情况和耐药基因突变的特点，以及为进一步快速检测SM耐药方法的建立提供依据，我们对从福建省、河南省、湖南省、安徽省和四川省及西藏自治区收集的结核分枝杆菌进行了SM耐药的相关研究。

1 材料与方法

1.1 菌株来源 302株菌株由福建省（76株）、河南省（17株）、湖南省（58株）、安徽省（10株）和四川省（31株）及西藏自治区（110株）的结核病防治机构提供，结核分枝杆菌标准株H37Rv购买于中国生物制品药品检定所。

1.2 菌株分离鉴定和药物敏感性试验 菌株用改良罗氏培养基进行培养，用含对硝基苯甲酸（PNB）和噻吩－2－羧酸肼（TCH）的培养基鉴别结核分枝杆菌，牛结核杆菌和非结核分枝杆菌。根据WHO推荐的比例法［1］进行药物敏感性测定，含药培养基的药物临界浓度分别是：INH 0.2μg/m L，RFP 40 μg/m L，SM4μg/m L，EMB 2μg/m L和PAS 0.5 μg/m L。

1.3 提取DNA 乱取常规L－J培养基上生长良好的结核菌落，一菌环溶于400μLTE（p H8.0）中，在旋涡振荡器上震荡至块状固体菌落均匀溶于TE中，沸水浴15 min，快速离心，取上清备用。……