三种鉴别诊断PRRSV美洲型经典毒株和变异株的方法比较

陈仕龙，陈少莺，江 斌，林锋强，朱小丽，王 劭，程晓霞，黄梅清，李兆龙，郑 敏

（1.福建省农业科学院畜牧兽医研究所，福州 350013；2.福建省畜禽疫病防治工程技术研究中心，福州 350013）

猪繁殖与呼吸综合征（俗称猪蓝耳病）(Porcine reproductive and respiratory syndrome, PRRS)，是由猪繁殖与呼吸综合征病毒(Porcine reproductive and respiratory syndrome virus, PRRSV)引起的，以成年母猪繁殖障碍和仔猪呼吸道疾病为主要症状的猪传染病。PRRSV分为美洲型和欧洲型两个基因型[1,2]。1996年以来，中国流行的是美洲型PRRSV[3]。2006年以来流行于中国的猪高热病，是由美洲型PRRSV变异株引起的一种急性高致死性疫病，对各日龄猪均敏感，主要表现为猪高热(41℃以上)、高发病率、高死亡率、低治愈率。

美洲型传统毒株和变异株鉴别诊断方法有RTPCR、荧光定量PCR及免疫荧光等方法。本文在建立间接免疫荧光（indirect fluorescent antibody test,IFA）鉴别诊断方法的基础上[4]，研制出免疫荧光鉴别诊断试剂盒。为了验证该免疫荧光诊断试剂盒的准确性、敏感性和实用性，本研究对临床送检的疑似病例及人工感染病料进行了RT-PCR、直接免疫荧光检测及病毒分离3种方法的检测，以期对各种诊断方法进行综合评价，旨在筛选出能适合各类型PRRS诊断的实用方法。

1 材料与方法

1.1 病料采集及处理 来源于福建省福清、长乐、南平等地区疑似PRRS病例87份。无菌采集病死猪的肺脏、肺门淋巴结、脾脏、肾脏等组织和，剪碎研磨，以Hank’s液制成1:5匀浆，加双抗各1000 U，4℃过夜，冻融3次，1600×g离心20 min，取上清液用于病毒分离及RT-PCR检测。采集疑似PRRS病料的肺脏和肺门淋巴结，制备冰冻切片，用于DFA检测。

1.2 试剂及毒株 美洲型PRRSV传统毒株和变异株免疫荧光鉴别诊断试剂盒由本试验室制备，主要包括只能识别传统美洲型PRRSV 的荧光单抗A61及既能识别传统美洲型又能识别变异型PRRSV的荧光单抗C65；……