青藤碱对肺癌A549细胞增殖的抑制作用

杨国才，雨 山，徐广全

青藤碱（sinomenine,SIN）是从中药青风藤中提取的生物碱单体，具有抗炎、免疫抑制、镇痛降压、抗心律失常等药理作用,已用于临床治疗类风湿性关节炎等[1]。近年研究显示，环氧合酶2(cyclooxygenase-2,Cox-2)与胃癌、肝癌、肺癌等多种肿瘤的发生发展密切相关，在非小细胞肺癌(non small cell lung carcinoma,NSCLC)组织中检测到Cox-2明显上调[2]。是否能通过抑制Cox-2的活性来治疗肿瘤，将有望成为新靶点[3-4]。有研究报道，SIN可能对Cox-2的活性有较强的抑制作用[5]。因此,研究SIN对A549细胞增殖及Cox-2活性的抑制作用，将可能为肺癌的治疗提供实验依据。

1 材料与方法

1.1 主要试剂及细胞株 青藤碱盐酸盐制剂（C19H23NO4）购自陕西省宝鸡市永嘉天然植物开发有限公司（产品批号YJ08011）。MTT检测试剂盒购自Amresco公司；羊抗兔Cox-2单克隆抗体（工作液1∶200)购自Santa Cruz公司；Annexin V-FITC/PI凋亡检测试剂盒购自北京赛宝公司。人肺癌A549细胞株由哈尔滨医科大学附属第二医学院科研实验中心提供。

1.2 实验方法

1.2.1 细胞培养及处理 A549细胞用含10%小牛血清的RPMI-1640培养，细胞置于37℃、含5%CO2饱和湿度的培养箱中。SIN用含血清的RPMI-1640培养液配制成梯度浓度母液，即1.0、2.5、5.0、10.0、20.0、25.0、50.0、100.0 mmol/L共8个浓度，现配现用。用时稀释成终浓度为 0.1、0.25、0.5、1.0、2.0、2.5、5.0、10.0 mmol/L8个梯度浓度。

1.2.2 MTT比色法 取对数生长期A549细胞，按2×104个细胞/孔密度接种于96孔板培养,每孔200 μL，24 h后换液。青藤碱组加入已配置好的含青藤碱终浓度分别为 0.1、0.25、0.5、1.0、2.0、2.5、5.0、10.0 mmol/L的RPMI-1640培养液200 μL。对照组为含A549细胞RPMI-1640培养液200 μL。另设空白对照组为无细胞的RPMI-1640培养液200 μL。每组设5个复孔,重复3次。继续培养24、48、72 h后,每孔加入MTT溶液(5 mg/mL)20 μL,避光继续培养4 h,吸出每孔内上清液,加入二甲基亚砜(DMSO)200 μL,振荡至结……