甲硝唑栓微生物限度检查方法学验证

王伟娜，王涛

(1.黑龙江省食品药品检验检测所，哈尔滨150001;2.哈尔滨市第五医院，150001)

甲硝唑栓用于治疗细菌性阴道炎和滴虫性阴道炎，具有抗厌氧菌和抗滴虫作用，是妇科常用药物。为有效控制药品质量，保证微生物限度检查方法的科学性和检验结果准确，笔者根据《中华人民共和国药典》2010年版[1]附录微生物限度检查的新要求，对甲硝唑栓进行了微生物限度检查方法学验证。

1 材料

1.1 培养基与试剂pH7.0氯化钠-蛋白胨缓冲液、营养琼脂培养基、玫瑰红钠琼脂培养基、营养肉汤培养基、胆盐乳糖培养基、沙氏葡萄糖液体培养基、沙氏葡萄糖琼脂培养基、甘露醇氯化钠琼脂培养基、溴化十六烷三甲基三甲铵琼脂培养基、无菌十四烷酸异丙酯。

1.2 菌种金黄色葡萄球菌[CMCC(B)26003]、枯草芽孢杆菌[CMCC(B)63501]、大肠埃希菌[CMCC(B)44102]、铜绿假单胞菌[CMCC(B)10104]、白念珠菌[CMCC(F)98001]、黑曲霉菌[CMCC(F)98003]。

1.3 样品甲硝唑栓(黑龙江省富东制药有限公司，批号:101005，规格:0.5 g)。

1.4 仪器HTY-2000B型集菌仪(杭州泰林生物技术设备有限公司)，薄膜过滤器(NS01-75D2，北京牛牛基因技术有限公司)。

2 方法与结果

2.1 菌液的制备取金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、枯草芽孢杆菌、铜绿假单胞菌的新鲜斜面培养物，接种于营养肉汤培养基，在30～35℃培养18～24 h;接种白念珠菌的新鲜斜面培养物至改良马丁培养基中，在23～28℃培养24 h。分别取上述培养液，用无菌0.9%氯化钠溶液10倍依次稀释至浓度为50～100 cfu·mL-1备用。取黑曲霉菌新鲜斜面培养物，加含0.05%聚山梨酯80的0.9%无菌氯化钠溶液[2]适量将孢子洗下，并用含0.05%聚山梨酯80的无菌0.9%氯化钠溶液10倍稀释至浓度为50～100 cfu·mL-1，备用。……