血红蛋白诱导的HO-1对离体星形胶质细胞损伤作用的研究*

陈 浩 ，王兴启 ，崔桂云 ，赵 辉 ，宋远见 ，高 丽 ，荆 佳 ，沈 霞

（1.徐州医学院附属医院 神经内科，江苏 徐州 221004；2.南京大学生命科学学院，江苏 南京 210093；3.徐州市中心医院 神经内科，江苏 徐州 221009；4.徐州医学院 神经生物学教研室，江苏 徐州 221004；5.南京医科大学附属脑科医院 神经内科，江苏 南京 210029）

脑出血（intracerebral hemorrhage，ICH）是神经科常见的急、危、重症，其发病率、致残率及死亡率均很高，严重威胁着人类健康。研究证实Hb与出血后脑损伤密切相关，作为Hb的分解代谢限速酶HO-1对疾病的发展具有重要影响。研究证实，诱导HO-1高表达可减轻神经细胞损伤而过高表达却会进一步加重神经细胞损伤[1-2]。已有实验证实3～30μmol/L Hb诱导的HO-1对星形胶质细胞具有保护作用[3]，那么更高浓度的Hb诱导的HO-1对星形胶质细胞的作用却未见相关报道。故本实验将选择更高浓度的 Hb（40μmol/L）诱导 HO-1表达，观察 HO-1对体外培养的星形胶质细胞的影响，研究结果将为进一步了解Hb诱导的HO-1在出血性脑疾病中的作用提供新观点。

1 材料与方法

1.1 材料与试剂

SD大鼠（1 d），由徐州医学院实验动物中心提供。高糖DMEM培养基购于GIBCO公司；胎牛血清购于杭州四季青公司；HO-1羊多克隆抗体购于Santa Cruz公司；Hb、ZnPPIX、β-actin 兔单克隆抗体、Bax小鼠单克隆抗体、Bcl-2兔单克隆抗体、p-JNK小鼠单克隆抗体及JNK兔单克隆抗体购于Cell Signal公司；GFAP兔单克隆抗体购于博士德公司；CCK-8购于日本同仁公司；Hoechst 33342试剂盒购于碧云天生物技术公司；RT-PCR试剂盒购于天根生物公司。

1.2 星形胶质细胞培养及鉴定

参照DALLAS等[4]的方法，取新生24 h内的SD大鼠，超净台内无菌条件下断头取脑分离出大脑皮层剪碎，胰酶消化、离心、吹打及过滤后，接种于培养瓶内，放入37℃，5%二氧化碳饱和湿度培养箱内培养。……