Aβ寡聚体预处理的BV2细胞对PC12细胞凋亡的影响

蔺慕会， 徐忠信， 陈晓虹

β淀粉样蛋白(amyloid protein，Aβ)导致的tau蛋白异常磷酸化、神经原纤维缠结、神经元凋亡被认为是导致阿尔茨海默病(Alzheimer disease，AD)的主要原因［1］。有研究认为小胶质细胞可在AD的发生发展中清除Aβ，起到保护神经元的作用，但也有研究认为小胶质细胞可通过炎症反应加重神经元损伤。本研究将预先被Aβ寡聚体处理的BV2细胞与PC12通过筛网共育，部分模拟体内小胶质细胞与神经元关系，来探讨小胶质细胞对神经元损伤的作用。

1 材料与方法

1.1 材料 PC12细胞购于中国科学院北京细胞生物研究所，BV2细胞购于上海复祥生物科技有限公司。细胞转移筛网购于美国BD Falcon公司;1640培养基、DMEM培养基、胎牛血清购于GIBCO公司;Aβ1-42，HFIP(六氟丙醇)，抗 tau，tau(pS396)一抗、二抗购于sigma公司;BCA蛋白定量试剂盒购于美国PIERCE公司;Western blot化学发光检测试剂盒购于武汉博士德公司;MTT(噻唑蓝)购于上海华舜生物工程有限公司;双染凋亡试剂盒购于上海宝赛公司。

1.2 方法

1.2.1 Aβ 寡聚体的制备及细胞培养 按Klein WL(2002)方法制备 Aβ1 ～42 寡聚体［2］，用1640培养液(含10%胎牛血清，100u/ml青霉素，100g/L链霉素)将PC12细胞培养在24孔培养板中。用DMEM培养液(含10%胎牛血清)将BV2细胞培养在转移筛网上。在BV2细胞经Aβ1-42处理24h后，将培养液及生长有BV2细胞的转移筛网同时移入PC12细胞培养板与PC12细胞共育。

1.2.2 分组 在PC12细胞培养液中分别加入0、1、5、10μmol/L Aβ1-42 处理24h 作为对照组即Aβ+PC12;实验组则在BV2细胞培养液中加入0、1、5、10μmol/L Aβ1-42 预处理24h，然后通过转移筛网将Aβ1-42处理过的BV2细胞及培养液移入未处理过的PC12细胞培养孔共育24h，即Aβ+BV2+PC12。

1.2.3 MTT方法检测 PC12细胞抑制率 弃去 PC12 上清，加入 MTT(0.5mg/ml)，37℃孵育 4h，细胞内见到蓝色沉淀后，吸出培养上清液，每孔加入200μl DMSO，使结晶物充分溶解，空白孔调零，经全自动酶标仪于490nm处测定各孔数值(655nm作为参考波长)。……