左归丸与右归丸对EAE大鼠APP及GAP-43表达的影响1)

王义周,寇 爽,闫翠翠,郑 琦,张 琪,赵 晖,王 蕾

多发性硬化(multiple sclerosis,MS)是中枢神经系统脱髓鞘的自身免疫性疾病。其病理特点是炎症引起的脱髓鞘和轴突损伤等[1]。实验性变态反应性脑脊髓炎(experimental autoimmuneencephalomyelitis,EAE)是目前公认的研究MS较为理想的动物模型[2]。前期临床和实验研究发现,左归丸与右归丸对MS病人及EAE大鼠具有较好的作用[3-6]。本实验利用Western-blot和实时荧光定量RT-PCR检测技术,进一步观察了两方对EAE大鼠脑白质和脊髓组织中与神经轴突损伤和再生相关的淀粉样前体蛋白(amyloid precursor protein,APP)及神经生长相关蛋白(growth associated protein-43,GAP-43)的蛋白水平与mRNA水平表达的影响,深入探讨左右归丸治疗EAE的可能机制,并比较两方药作用的异同,为临床中医药辨证论治MS及其相关神经退行性病变提供科学依据。

1 材料与方法

1.1 实验动物 225只SPF级雌性 Lewis大鼠,体重150 g～180 g,由北京维通利华实验动物技术有限公司提供,许可证号为SCXK(京)2006-0009。

1.2 药品及试剂 醋酸泼尼松片:天津太平洋制药有限公司生产;左归丸与右归丸:河南省皖西制药股份有限公司生产;豚鼠MBP68-86(YGSLPQKSQRSQDENPV):北京中科亚光生物科技有限公司合成;不完全福氏佐剂(Incomplete Freund’s Adjuvant,IFA)和结核分枝杆菌病(Mycobacterium Tubercusis,H37Ra,MTB):美国Difco公司生产;APP、GAP-43和 GAPDH抗体:美国 Epitomics公司生产;Western-blot试剂盒:北京康为世纪生物技术有限公司提供;实时荧光定量RT-PCR相关试剂:美国 Takara及Invitrogen公司提供;引物由上海生工生物有限公司合成;Fermentas K1622 RT逆转录试剂盒购自MBI公司;SYBR Green PCR Master Mix试剂盒购自美国应用生物公司。

1.3 模型制备 将大鼠随机分为正常组、模型组、激素组、左归丸组和右归丸组。每组45只。模型组和各治疗组……