土鳖虫超微粉体中游离氨基酸的测定及指纹图谱研究

蔡 萍， 万 丹， 肖 娟， 张水寒， 蔡光先

(湖南省中医药研究院，湖南省中药粉体与创新药物省部共建重点实验室，湖南省教育厅中药粉体技术创新团队，湖南长沙410013)

土鳖虫，又称地鳖虫，在我国具有悠久的药用历史。其雌虫体具有散血瘀、消坚结、解凝活血、接骨续筋、消肿止痛、下乳通经等功效。在我国，常用于入药的土鳖虫有地鳖 Eupolyphaga sinensis Walker、冀地鳖 Steleophaga plancyi(Boleny)和金边土鳖Opishoplatia orientalis Burmeister［1］。土鳖虫中含有丰富的氨基酸［2-4］。目前，用柱前衍生化法分析土鳖虫氨基酸的报道还未见，本实验采用PITC柱前衍生化高效液相色谱法检测土鳖虫中的游离氨基酸，为评价土鳖虫超微粉体内在质量提供一定的参考依据。

1 实验仪器、试药与药材

1．1 仪器 岛津LC-10ATVP高效液相色谱仪，配置SPD-M10AVP型二极管阵列检测器、CTO-10ASVP柱温箱，CLASS-VP岛津工作站;KQ3200型超声波清洗器(220V，40KHz);BFM-T6BI“贝利”微粉机(济南贝利粉碎技术工程有限公司);旋涡混合器:金坛市大地自动化仪器厂;T-214型电子分析天平(北京赛多利斯仪器系统有限公司)。

1．2 试剂 甲醇、乙腈(色谱纯，Tedia公司生产)，冰醋酸(色谱纯，天津市科密欧化学试剂开发中心)，异硫氰酸苯酯(PITC)(上海金山亭新化工试剂厂)，无水乙酸钠、三乙胺、正己烷均为恒兴试剂，水为重蒸馏水，其它试剂均为分析纯。

1．3 对照品 天冬氨酸 Asp，谷氨酸 Glu，丝氨酸Ser，甘氨酸 Gly，组氨酸 His，精氨酸 Arg ，丙氨酸Ala，脯氨酸 Pro，缬氨酸 Val，酪氨酸 Tyr，异亮氨酸Ile，亮氨酸 Leu，色氨酸 Trp，苯丙氨酸 Phe，赖氨酸Ly，上述氨基酸对照品均购于Sigma公司。

1．4 药材 10批土鳖虫药材分别购自四川、广西、湖南、陕西、江西、安徽等地(见表1)，经湖南中医药研究院生药鉴定室鉴定为地鳖、冀地鳖及金边土鳖虫雌体，加工成超微粉体。……