壮骨灵胶囊中淫羊藿苷的含量测定

李健英，王连芝

(黑龙江中医药大学中医药研究院，黑龙江 哈尔滨 150040)

淫羊藿为小檗科淫羊藿属植物，是使用最为悠久及药用来源种类最多的中药之一，最早记载于《神农本草经》［1］。淫羊藿性辛、甘、温，具有补肾阳、强筋骨、祛风湿的作用。目前研究证明，淫羊藿含有多种化学成分，有丰富的药理作用。现代研究认为，淫羊藿苷是主要成分，作为药材品质评价的指标［2］，具有激素样作用。淫羊藿在老年性骨质疏松症的临床防治中，其疗效已得到肯定，对破骨细胞有直接抑制作用［3］，能直接作用于人成骨细胞，促进成骨细胞的增殖和功能，影响骨的代谢［4］。

壮骨灵胶囊(由淫羊藿、白术、熟地黄等五味中药组成)有补肾壮骨、健脾行气、活血止痛功效，用于治疗骨质疏松症。本研究采用高效液相色谱法，对壮骨灵胶囊中淫羊藿苷含量进行测定，控制药品质量。实验表明，该方法操作简便、稳定、精密度高、结果准确重现性好，现报告如下。

1 实验材料

高效液相色谱仪(美国Waters公司:Waters2695－2998型);超纯水处理器(Millipore公司);KQ一250B超声波清洗器;电子分析天平(瑞士 METTLER－TOLEPO公司);淫羊藿苷对照品(中国药品生物研究所提供，批号110737－200414);壮骨灵胶囊(黑龙江中医大学中医药研究院制备，批号201026);色谱纯乙腈(天津康巢科技开发有限公司，批号20090609);水为超纯水，甲醇、乙酸为分析纯。

2 方法与结果

2.1 色谱条件 色谱柱 Diamonsil C18柱(5μm，250mm ×4.6mm);流动相:乙睛 － 水(30∶70);检测波长:270nm;柱温:40℃;流速:1.0mL/min。

2.2 溶液的制备

2.2.1 待测样品溶液 壮骨灵胶囊内容物粉末0.5g，精密称定，置锥形瓶中，精密加低浓度乙醇20mL，称定重量，超声处理30min，再称定重量，用低剂量乙醇补足减量，摇匀、过滤、取续滤液，即待测样品溶液。

2.2.2 对照品溶液 精密称取淫羊藿苷对照品适量，加甲醇制成每1mL含10μg的溶液，作为对照品溶液。

2.2.3 阴性对照溶液 取除淫羊藿外的其他味药材，按壮骨灵胶囊制备方法制备阴性制剂，取阴性制剂0.5g按(2.2.1)制备方法得阴性对照溶液。

2.3 系统适应性试验 精密吸取淫羊藿苷溶液15μl，注入高效液相色谱仪，理论板数淫羊藿苷峰不低于2 500。淫羊藿苷对照品保留时间为=10.715min，色谱峰峰面积积分值为582 588，确定此色谱峰为淫羊藿苷对照品的色谱峰，色谱图见图1。

图1 淫羊藿苷对照品的色谱图

2.4 线性关系试验 按色谱条件分别取对照品溶液，用0.45μm 的微孔滤膜过滤，精密吸取 2.0、4.0、6.0、8.0、10.0μl对照品溶液，注入高效液相色谱仪中，记录色谱图。以进样含量为横坐标，色谱峰峰面积为纵坐标绘制标准曲线见图2。各浓度相应的峰面积经统计处理，求得回归方程为Y=3 903 265X－2 442.1，相关系数 r=0.999 9，结果表明，淫羊藿苷在 0.1～0.18μg的范围内线性关系良好，实验数据见表1。

图2 线性关系标准曲线图

2.5 空白干扰实验 精密吸取供试品(壮骨灵胶囊)溶液、阴性对照溶液，对照品溶液，在2.1色谱条件进样，壮骨灵胶囊色谱图在10.261min处出现色谱峰，见图3，阴性溶液色谱图见图4，由图可知阴性溶液、壮骨灵溶液含量测定无干扰。

表1 标准曲线测定结果

图3 壮骨灵胶囊中淫羊藿苷色谱图

图4 空白溶液色谱图

2.6 精密度实验 精密吸取浓度为10μg/mL的淫羊藿苷对照品溶液15μL，连续5次注入同一台液相色谱仪中，考察精密度，以峰面积计算 RSD，淫羊藿苷RSD=0.4%。说明精密度良好，测定结果可靠。

2.7 稳定性实验 精密称取供试品，按2.2.1项下方法制备供试品溶液，于 0、2、4、6、8、10h 分别进样按设定时间测定，计算淫羊藿苷含量，平均含量0.284 3(mg/g)，RSD=1.7%，表明样品在制备后 10小时内是稳定的。

2.8 重现性实验 取同一批样品5份，按2.2.1项下方法制备供试品溶液，测定。计算淫羊藿苷含量，平均含量0.292 5(mg/g)，RSD=1.6%，表明该方法重现性好。

2.9 加样回收率试验 精密称取已知含量的样品6份，各约0.2g，精密称定，分别加入浓度为10μg/mL的淫羊藿苷对照品溶液10mL，即0.1mg，混匀后，按2.2.1项下方法处理，进样，测定，计算淫羊藿苷含量。实验结果表明，该方法回收率较高，测定结果可靠，平均回收率102.48%，RSD=1.35%，实验结果见表2。

表2 加样回收率实验

2.10 样品含量测定 取三批供试品(批号20101026、201028、20101108)，每批2 份，每份约0.5g，精密称定，按2.2.1项下方法处理，进样20μL，测定峰面积。取 10μg/mL的淫羊藿苷对照品溶液进样15μL，峰面积积分值为586 896.5，采用外标一点法计算含量，结果表明，3批供试品中，淫羊藿苷含量平均值为0.287 8mg/g，按降幅10%为本品含量限定值，则其含量应不低于0.26mg/g，按此规定上述测得3批供试品溶液均合格，结果见表3。

表3 样品含量测定

3 讨论

参照《中国药典》和文献资料，选择淫羊藿苷检测波长为 270nm，流动相:乙睛 －水(30∶70)，柱温:40℃，流速:1.0mL/min，此方法样品处理简单操作方便，重现性好，精度高，可用于壮骨灵胶囊质量控制。

超声技术在中药有效成分提取、分离与制备工艺中的应用，大大提高了提取率，缩短了提取时间。

采用不同提取溶剂实验，如甲醇、70%乙醇、50%乙醇等，结果以低浓度乙醇超声提取 2次，每次30min，方法简单，杂质干扰少，提取比较完全。

［1］ 蔡德，佘白蓉，杨绮华，等.淫羊藿总黄酮提取及其含量测定［J］.广东药学院学报，2005，21(1):75 －76.

［2］ 谢娟平，孙文基.淫羊藿属植物化学成分及药理研究进展［J］.海峡药学，2006，18(5):17 －19.

［3］ 傅得兴，高素强，张红梅.淫羊藿及其复方防治骨质疏松的研究进展［J］.中国中药杂志，1999，24(4):249 －251.

［4］ 于波，杨久山，刘岩，等.淫羊藿苷对人成骨细胞的作用［J］.中医正骨，2006，18(6):17 －18.