HPLC法对细辛含药血清中AAⅠ的含量测定

黄必胜，周祯祥，黄保希

1 仪器与试剂

1.1 仪器

戴安高效液相色谱仪：P680型输液泵、在线脱水机、手动进样器、TCC-100柱温箱、PDA-100二极管阵列检测器、chromeleon色谱工作站，戴安公司。

1.2 试剂

马兜铃酸A(AAⅠ)：中国药品生物制品检定所（批号：110746-200305)；甲醇（色谱纯）：上海振兴化工一厂；冰乙酸（分析纯）：天津市科密欧化学试剂开发中心；重蒸馏水、细辛含药血清和空白含药血清：由课题组提供。

2 方法与结果

2.1 色谱条件

色谱柱：D i a m o n T M O D S-C 1 8(2 5 0 mm×4.6 mm，5 μm)；流动相：甲醇-水-醋酸（72∶27∶1）；柱温：室温；检测波长：390 nm；流速：1 mLmin-1。

2.2 AAⅠ对照品溶液、供试品溶液和空白血清组溶液的制备

精密称取适量AAⅠ对照品8 mg，置于10 mL的容量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，0.45 μm微孔滤膜过滤，取续滤液，制得AAⅠ对照品溶液，避光保存备用。精密量取细辛含药血清和空白血清各15 mg分别置于25 mL的容量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，0.45 μm微孔滤膜过滤，取续滤液，制得供试品溶液和空白对照组溶液，避光保存备用。

2.3 系统适用性实验

取AAⅠ对照品溶液、供试品溶液及空白对照品溶液各20 μL，注入高效液相色谱仪按以上色谱条件测定，记录色谱图，结果见图1～3。由图1～3可知，AAⅠ的保留时间为16.833 min。

2.4 标准曲线的制备与线性考察

精密吸取AAⅠ对照品储备溶液0.06 mL，0.12 mL，0.3 mL，0.6 mL，3 mL，6 mL，分别置于10 mL的容量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，进样为20 μL，记录峰面积，以AAⅠ对照品溶液浓度为横坐标，峰面积为纵坐标，绘制标准曲线（见表1，图4）。结果表明，AAⅠ峰面积在0.2～0.6 mgL-1浓度范围内呈良好的线性关系，最低检测限为0.2 μgmL-1。回归方程为Y=7262.8X+2.4（r=0.9988，n=5）。

表1 AAⅠ对照品标准曲线测定峰面积

图4 AAⅠ对照品标准曲线

2.5 精密度考察

精密吸取AAⅠ对照品溶液20 μL，进样5次，得峰面积值的RSD=2.68%（n=5），结果表明仪器与色谱条件具有良好的精密度。……