响应面法优化微量热法检测用菌体培养基的实验研究

徐 斐，农卫良，管 骁，秦旭锐，石服鑫

(上海理工大学医疗器械与食品学院，上海200093)

响应面法优化微量热法检测用菌体培养基的实验研究

徐 斐，农卫良，管 骁，秦旭锐，石服鑫

(上海理工大学医疗器械与食品学院，上海200093)

利用微量热法对酱牛肉中的细菌进行快速定量检测，需要对检测用菌体培养基进行优化从而实现其快速增殖，以期缩短检测时间，同时放大细菌生长热信号。本文采用Plackett-Burman实验设计确定了培养基配方的主要因素后，再用最陡爬坡实验及Box-Behnken实验设计进一步确定了各因素的最优水平。实验结果表明，葡萄糖、pH、胰蛋白胨三个因素是影响酱牛肉中优势细菌生长的主要因素;优化后的最佳培养基配方为:葡萄糖1.42g/L、胰蛋白胨8.45g/L、硫酸镁0.2g/L、氯化钠5g/L、酵母浸膏4.5g/L、pH 7.12。用此培养基培养酱牛肉中的细菌，可实现其快速增殖，并显著缩短生长延滞期。

微量热法，响应面分析，培养基优化，延滞期

1 材料与方法

1.1 材料与仪器

受试菌种 均分离于市售酱牛肉中，由本实验室鉴定、计数。

UV-2800型可见分光光度计 尤尼柯(上海)仪器有限公司;超净工作台、全自动灭菌锅、摇床等上海博讯有限公司。

1.2 实验方法

1.2.1 培养方法 将活化好的各菌种按实际样品中的平均比例混匀后，取5mL菌悬液接种于装有150mL培养基的250mL三角瓶中，置于摇床(100r/min)中37℃培养。

1.2.2 培养基配方优化实验设计

1.2.2.1 显著影响因子的确定 根据菌种的大致营养需求，以7种对菌体生长可能造成较大影响的培养基成分以及pH作为实验设计中的8个影响因素，以培养5h后的细菌生物密度(即发酵液在650nm处的吸光度，反映菌体生长情况)为响应值进行Plackett-Burman实验设计，实验次数共32次，因子选择及实验设计见表1。……