响应面法优化大肠杆菌表达Hyperthermus butylicus耐热醛缩酶诱导条件的研究

裴晓林，李诚璐，王秋岩，谢开林，傅陈露，张 勇，谢 恬

(杭州师范大学生物医药与健康研究中心，浙江 杭州 310012)

响应面法优化大肠杆菌表达Hyperthermus butylicus耐热醛缩酶诱导条件的研究

裴晓林，李诚璐，王秋岩，谢开林，傅陈露，张 勇，谢 恬

(杭州师范大学生物医药与健康研究中心，浙江 杭州 310012)

为了提高重组耐热2-脱氧核糖-5-磷酸醛缩酶的表达水平，该文基于中心组合实验的响应面分析方法，对基因工程E.coli的诱导条件进行了优化，具体考察因素包括诱导剂(异丙基-β-D-硫代半乳糖，IPTG)浓度和诱导时机.实验结果表明该方法可以提高目标蛋白的表达量，依据回归分析确定了最佳诱导条件为：IPTG浓度0.57 mM，诱导时机OD600为0.76，理论最佳DERA的比活力为1.124 u/mg，而实际平均比活力达到1.178 u/mg，两者几乎相等，说明该模型与实际情况基本相符.

2-脱氧核糖-5-磷酸醛缩酶；响应面；中心组合；诱导条件；大肠杆菌

0 前 言

不对称醛醇缩合反应在精细化学品制备中是一类极为重要的反应，目前主要采用金属离子的催化，而由醛缩酶催化的生物方法显示出更高的环境友好性[1].2-脱氧核糖-5-磷酸醛缩酶(2-Deoxyribose-5-phophate aldolases，DERAs, EC 4.1.2.4)属于第Ⅰ类醛缩酶，催化乙醛和D-3-磷酸甘油醛之间的缩合反应，形成5-磷酸-2-脱氧核糖[2].值得注意的是，DERAs与其它醛缩酶比较，最大的区别在于其底物和产物都是醛类，因此可以催化连续的醛缩反应[3].研究表明，该酶以3分子的乙醛为底物，经过2步连续的缩合生成2,4,6-三脱氧己糖，可以作为中间体应用于抗癌药物Epothilone A和C、 Iminocyclitols，以及降血脂药物Statins类等的合成……