当归A3活性部位对小鼠巨噬细胞环氧化酶-2活性及基因表达的影响

沈建芬，张又枝，肖军花，王嘉陵

(1.浙江省嘉兴市第一医院，浙江嘉兴 314000;2.华中科技大学同济医学院基础医学院药理学系，武汉 430030)

当归为伞型科植物当归〔Angelica Sinensis(Oliv.)Diels〕的干燥根，具有抗炎、镇痛和补血调经之功效。其主要活性成分为当归挥发油，实验证明当归挥发油具有抗炎镇痛作用，且其抗炎作用与减少 PGs量有关［1］。

当归A3活性部位(以下简称A3)是从当归总挥发油(CO2超临界法提取)中萃取得到的中性、非酚性部位［1］。我们前期的研究［3］发现:A3对小鼠二甲苯致小鼠耳廓肿胀和角叉菜胶致大鼠足趾肿胀的炎症模型均具有明显的抗炎作用，并对脂多糖 (lipopolysaccharides，LPS)诱导离体大鼠子宫组织环氧化酶-2(cyclooxygenase-2，COX-2)表达增高具有抑制作用。本文采用小鼠巨噬细胞株RAW264.7为对象来制备炎症模型，观察A3对LPS诱导的PGE2生成、COX-2酶活性及基因表达的影响，进一步从细胞及基因水平探讨其抗炎作用机制。

1 材料与方法

1.1 实验材料 当归油(angelicaoil，AO)含藁本内酯＞70%，由山东绿叶制药股份有限公司提供;当归A3部位，由华中科技大学同济医学院药理学系植化室提供，每100 mg A3用浓度10 g·L－1吐温80(Tween-80)助溶。小鼠巨噬细胞株RAW264.7由同济医学院病理生理教研室叶笃筠教授慷慨惠赠。脂多糖(LPS)购自Sigma公司;NS-398购自Cayman公司;花生四烯酸(arachidonic acid，AA)及 ELISA试剂盒购自R＆D公司;RTzol总RNA提取试剂购自Gibco Brl公司;COX-2多克隆抗体购自武汉博士德公司，COX-2及β-actin引物设计合成均由北京奥科公司提供;其他试剂均为国产分析纯。垂直电泳槽和转移电泳槽购自Bio＆Rad，PCR仪(PCYL001)购自Hybaid。全自动数码成像系统及分析系统(GeneGenius)购自美国SYNGENE公司。

1.2 细胞培养及分组 RAW264.7用含10%FBS的DMEM培养液培养，3～4 d传代1次，采用10代左右的细胞进行实验。……