高糖对原代培养人肾小球系膜细胞表达 MMP-9、TIMP-1的影响

尹燕志 牟授菡 鞠建伟＊ 吕丛奎 孙晓燕 邓磊修

高糖对原代培养人肾小球系膜细胞表达 MMP-9、TIMP-1的影响

尹燕志1牟授菡1鞠建伟1＊吕丛奎1孙晓燕1邓磊修2

（1山东烟台经济技术开发区医院，烟台264006；2山东先声麦得津生物制药有限公司，烟台264003）

目的 了解高糖对原代培养的人肾小球系膜细胞表达 MMP-9、TIMP-1和 MMP-9／TIMP-1的影响，进一步探讨糖尿病肾病的发病机制。方法 取自愿水囊引产的胎儿肾，解剖取肾皮质剪碎，应用肾皮质组织块法合优生选择法对人肾小球系膜细胞进行原代培养。ELISA方法检测 MMP-9、TIMP-1的表达变化。结果 与正常组相比较，高糖组 MMP-9在24h、48h、72h均显著降低（P＜0.01），TIMP-1在24h、72h可显著升高 （P＜0.05），48h表达降低；MMP-9／TIMP-1的比值在24h、48h、72h均显著降低（P＜0.01）。结论 高糖能够降低 MMP-9／TIMP-1，与肾小球系膜细胞细胞外基质降解能力降低密切相关。

人系膜细胞；原代培养；金属基质蛋白酶9；金属蛋白酶组织抑制剂1；高糖

细胞外基质（extracellular matrix，ECM）增多是糖尿病肾病（diabetic nephropathy，DN）的主要病理标志［1］，基质金属蛋白酶（matrix metalloproteinase，MMPs）、金属蛋白酶组织抑制剂（tissue inhibitor of metalloproteinases，TIMPs）是参与ECM 降解的主要酶系统［2］。本研究通过体外人胚肾小球系膜细胞（glomerular mesangial cells，GMCs）原代培养并给予高糖环境刺激，模拟糖尿病（diabetes mel-litus，DM）体内病理环境，了解高糖对GMCs表达MMP-9，基质金属蛋白酶组织抑制因子-1（tissue inhibitors of metalloproteinases-1，TIMP-1）的 影响，进一步探讨DN的病理生理机制。

材料和方法

1.材料

DMEM低糖培养基（美国ScienCell），胎牛血清（Gibco公司），MsCM（含2%FBS和 MsCGS）（美国ScienCell），胶原酶Ⅳ（Gibco公司），0.25%胰蛋白酶（含0.02%EDTA）（Gibco公司），牛血清白蛋白（美国Amresco）小鼠抗人α-肌动蛋白、小鼠抗人抗肌球蛋白单克隆抗体、小鼠抗人抗波形蛋白、小鼠抗人抗结蛋白、细胞角蛋白（武汉博士德）、Ⅷ因子一抗（SantaCruz公司），羊抗鼠IgG-FITC荧光二抗（武汉博士德），人 MMP-9、TIMP-1ELISA 试剂盒（武汉博士德）。……