Wnt1基因在乳腺癌细胞株MCF-7/ADR中的表达与多柔比星化疗抵抗关系的研究*

张战民，张晓华

(南昌大学第一附属医院肿瘤科，南昌 330006)

Wnt信号通路是一个复杂的蛋白质作用通路，其参与细胞的增殖、分化、代谢及凋亡，是细胞发育所必需的[1]，调节着细胞行为及细胞的相互作用，因此，此通路不仅在胚胎发育调控中起至关重要的作用，而且与肿瘤的发生和发展密切相关[2]。研究表明，Wnt信号通路与多种肿瘤的的生长、复发和耐药有着密切的关系[3-4]。本研究通过沉默Wnt1基因的表达，观察乳腺癌细胞对多柔比星敏感性的变化，为寻找克服乳腺癌耐药性的新靶点提供依据,现将研究结果报道如下。

1 材料与方法

1.1材料 人乳腺癌MCF-7/ADR细胞株由中国医学科学院血液学研究所提供，此细胞株的原代培养细胞供体均一，取材部位及组织类型稳定，为已鉴定细胞；PRMI 1640培养基和胎牛血清购于美国Gibco公司，四甲基偶氮唑盐(MTT)、青霉素、链霉素、多柔比星为美国Sigma公司产品，总RNA提取试剂盒采用美国Promega公司产品，逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)试剂盒为日本Takara公司生产，Lipofectamine 2000转染试剂盒购自美国Invitrogen公司，Wnt1 siRNA双链干扰序列由上海吉玛制药技术有限公司合成。

1.2方法

1.2.1MCF-7/ADR细胞在Wnt1基因沉默前后对多柔比星耐药性的比较

1.2.1.1MCF-7/ADR细胞的培养 采用含10％胎牛血清，100 U/mL青霉素，100 U/mL链霉素、RPMI 1640的完全培养基，在37 ℃、5％CO2的饱和湿度条件下培养，每2～3 d换液并传代1次，采用0.02％乙二胺四乙酸二钠(EDTA-Na2和0.25％胰蛋白酶的1∶1混合液进行消化，且使多柔比星梯度诱导浓度最终维持在1 μg/mL。

1.2.1.2细胞总RNA的提取及光密度值的测定 培养出的MCF-7/ADR细胞每(1～5)×106个细胞加1 mL TRIzol试剂，吸管吹吸数次，15～30 ℃孵育5 min后，加0.2 mL氯仿，摇匀15 s，15～30 ℃孵育2～3 min，4 ℃离心15 min(离心半径8 cm，12 000 r/min)。……