新型抗菌蛋白天蚕素-人溶菌酶在大肠杆菌中的表达条件优化及纯化

卢雪梅，金小宝，朱家勇

(1.广东药学院 药用生物活性物质研究所，2.广东省生物活性药物研究重点实验室，广东 广州 510006)

新型抗菌蛋白天蚕素-人溶菌酶在大肠杆菌中的表达条件优化及纯化

卢雪梅1，2，金小宝1，2，朱家勇1，2

(1.广东药学院 药用生物活性物质研究所，2.广东省生物活性药物研究重点实验室，广东 广州 510006)

目的 探讨重组家蝇天蚕素-人溶菌酶(Mdc-hly)在大肠杆菌中的表达条件及纯化。方法 利用SDSPAGE电泳和BandScan凝胶电泳图像分析系统研究诱导温度、诱导时机、异丙基硫代-β-D半乳糖苷(IPTG)诱导浓度和诱导时间对融合蛋白表达的影响。融合蛋白经His琼脂糖柱亲和色谱纯化后，Western blot鉴定。结果 在起始菌浓度为A600=0.6时加入浓度为1.0 mmol/L的IPTG，37℃诱导6 h，融合蛋白的表达量最高，占菌体总蛋白的39.1%。纯化后融合蛋白纯度可达95%，Western blot鉴定为目的蛋白。结论 确定了重组融合蛋白的最佳表达条件，并纯化了目的蛋白。

家蝇天蚕素;溶菌酶;重组融合蛋白;表达条件;纯化

由于环境的改变和微生物的适应性进化，细菌耐药性已成为影响公众健康的严重问题，人们不断地去研究、开发新型抗菌药物来对付耐药菌，其中肽类抗菌物质如溶菌酶、天蚕素等成为近年研究热点。溶菌酶可以破坏细菌细胞壁，对革兰阳性菌具有较强的杀菌活性［1］。天蚕素是一类具有广谱抗菌活性的抗菌肽，主要作用于细菌的细胞膜［2-4］。虽然溶菌酶、天蚕素等在耐药性问题日益严重的情况下显示出了良好的应用前景，然而与传统抗生素相比，目前所发现的肽类抗菌物质抗菌活性还不够理想，如天蚕素类抗菌肽对不同细菌的杀灭能力并非完全相同;溶菌酶的抗菌谱还不广泛，若单独使用对革兰阴性菌的抑制作用并不明显等。……