FKHRL-1基因转染对血管损伤后平滑肌细胞增殖能力的影响

孙 贇 蔡文玮 胡 萍 (上海交通大学医学院附属第九人民医院老年病科，上海 200011)

经皮冠状动脉腔内成形术(PTCA)术广泛开展的重要因素之一〔1〕，尤其是许多亚组患者，如糖尿病或小血管弥漫性病变，发生率更高。血管平滑肌细胞(VSMC)过度增生所致的新生内膜增厚，是造成PTCA术后血管再狭窄的主要原因〔2〕。Forkhead家族具有一个高度保守的DNA结构域，自1989年首次被发现以来，这一新兴的转录因子家族已经有了19个亚家族，表现出生物活性的高度多样性，其家族成员FKHRL-1(FoxO3a)，更是广泛表达于多个组织器官中，在细胞发育、代谢、凋亡及癌变过程中起着关键性的调控作用。本研究探讨FKHRL-1基因转染对VSMC增殖能力的影响，为基因治疗PTCA术后再狭窄在实际中的应用提供一种可行的途径。

1 材料与方法

1.1 动物与分组 清洁级SD大鼠(上海斯莱克实验动物有限公司)，雄性，体质量280～320 g;动物生产许可证号为SCXK(沪)2007-2005，使用许可证号为SYXK(沪)2007-2007。其中，先取21只SD大鼠分成对照组(C1组，n=3)和球囊损伤组(S组，n=18)，其中球囊损伤组又分为：损伤后0.5 h(S1组，n=3)、1 h(S2 组，n=3)、2 h(S3 组，n=3)、3 h(S4 组，n=3)、6 h(S5组，n=3)和12 h(S6组，n=3)。再取15只SD大鼠，完成颈总动脉球囊损伤建模后、以损伤后2 h为时间截点，随机分为3组：正常对照组(C2组，n=5)、空白对照组(N组，n=5)和体外转染组(T组，n=5)。

1.2 主要仪器与试剂 2F动脉取血栓导管(120602F，爱德华生命科学有限公司);DMEM培养液(Hyclone);0.25%胰蛋白酶-EDTA(Gibco);胎牛血清(Hyclone);二甲基亚砜(DMSO)、MTT(Sigma);FoxO3a抗体、p-FoxO3a抗体、HA-Tag兔抗单克隆抗体(CST);PCR引物(上海英维捷基贸易有限公司);质粒HA-FoxO3a TM(Addgene、质粒号1788)(图1);QIAGEN plasmid mini kit(Qiagen、货号12125);脂质体LipofectAMINETM2000由上海交通大学附属第九人民医院组织工程重点实验室提供。……