董 毅 程艳香
宫颈癌是1种常见的妇科恶性肿瘤,晚期或复发患者治愈率不高、预后极差,寻求新的治疗靶点已成为近年来的研究热点。环氧合酶-2(cyclooxygenase-2,COX-2)在许多肿瘤组织中高表达,与肿瘤细胞增殖、抗凋亡和肿瘤血管生成关系密切。缺氧诱导因子-1α(hypoxia inducible factor-1α,HIF-1α)在多种实体肿瘤中表达明显上调,促进肿瘤细胞在低氧环境下的生存和增殖,抑制其凋亡,并与肿瘤血管的生成密切相关。本研究采用免疫组织化学技术检测宫颈鳞状细胞癌组织中COX-2和HIF-1α的表达,探讨其在宫颈鳞状细胞癌发生发展中的作用及两者的相关性。
选取2008年5月~2010年12月本院收治的40例宫颈鳞状细胞癌患者癌组织标本为实验组,相应癌旁正常宫颈组织标本为对照组;癌旁正常宫颈组织为肿瘤边缘经病理学检查无肿瘤细胞浸润的组织。患者年龄28~71岁,平均年龄(40.73±9.56)岁;所有患者术前均未接受放化疗,术后病理检查确诊为宫颈鳞状细胞癌。本研究所有标本采集均经医院伦理委员会批准,并获得患者或家属的知情同意书。
1.2.1 主要试剂 兔抗人COX-2多克隆抗体和兔抗人HIF-lα多克隆抗体购自武汉博士德公司。β-action一抗、二抗购自美国Santa Cruz公司。二氨基联苯胺(DAB)显色剂及免疫组化链霉菌抗生物素蛋白-过氧化物酶(SP)试剂盒购自北京中杉金桥生物技术有限公司。
1.2.2 免疫组化方法 将标本立即经甲醛固定,石蜡包埋切片(厚度 4 μm ),微波处理切片后常规脱蜡水化,3%H2O2阻断内源性过氧化物酶,正常山羊血清封闭,依次加一抗、二抗及链霉素-过氧化物酶,DAB 显色,苏木精复染,透明封片。……